پایان نامه تأثیر آنزیم بر روی کالاهای رنگرزی شده با رنگ مستقیم

اختصاصی از کوشا فایل پایان نامه تأثیر آنزیم بر روی کالاهای رنگرزی شده با رنگ مستقیم دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:59

 فهرست مطالب:

فصل یکم   ۰
۱-۱) مقدمه   ۰
اصول واکنشهای آنزیمی   ۳
ساختمان آنزیمها   ۵
چگونگی عمل کردن آنزیمها   ۷
نامگذاری و طبقه بندی آنزیمها   ۸
شش طبقه اصلی آنزیمها عبارتند از : (۲۷)   ۸
واحد فعالیت آنزیم :   ۱۱
اثر غلظت آنزیم و غلظت سوبسترا  بر واکنش آنزیمی :   ۱۲
اثر حرارت بر واکنش آنزیمی  :   ۱۶
اثر PH بر واکنش آنزیمی :   ۱۶
اثر PH بر فعالیت آنزیمها :   ۱۷
منابع آنزیمی: (۵)   ۱۷
جداسازی آنزیمها: ( ۶ )   ۱۸
آنزیمهای نامنظم یا آنزیمهای آلوستریک :   ۱۹
بررسی خواص چند آنزیم:   ۲۰
آمیلازها Amylases :   ۲۰
لیپازها Lipases :   ۲۱
پکتیاز Pectinases :   ۲۱
سلولازها Cellulases :   ۲۲
پروتازها Proteases :   ۲۲
اکسی دور دوکتازها ( Oxidoreductases ) :   ۲۳
کاربرد آنزیمها در صنعت :   ۲۴
نقش و کاربرد آنزیمها در صنعت نساجی :   ۲۵
۱-۲) اهداف پروژه   ۲۷
۱-۳) اهمیت پروژه   ۲۷
۱-۴) کارهای انجام شده قبلی   ۲۸
۱-۴-۱) هیدرولیز آنزیمی سلولز و عومل مؤثر در شدت هیدرولیز   ۲۸
۱-۴-۲) اثر آنزیم سلولاز بر رنگ پذیری الیاف سلولزی   ۳۶
۱-۴-۳) تأثیر رنگ بکار رفته روی پارچه در شدت هیدرولیز آنزیمی   ۳۹
فصل دوم   ۴۵
۲-۱) مواد مورد استفاده   ۴۶
۲-۲) وسایل مورد استفاده   ۴۶
۲-۳) روش انجام آزمایشات   ۴۶
۲-۳-۱) رنگرزی پارچه های پنبه ای قبل از هیدرولیز آنزیمی   ۴۷
۲-۳-۲) هیدرولیز آنزیمی پارچه های پنبه ای قبل از رنگرزی   ۵۰
فصل سوم   ۵۳
نتیجه:   ۵۴
مراجع   ۵۵
الف) مقالات مندرج در نشریات ادواری   ۵۵
ب: کتب   ۵۹

فصل یکم
1-1) مقدمه
همگام با رشد فزایندة استفاده از فرآیندهای بیوتکنولوژی در صنعت، استفاده از آنزیم‌ها در صنایع نساجی نیز گسترش چشمگیری داشته است. به عنوان مهمترین نمونه از این موارد می‌توان هیدرولیز کتنرل شده آنزیمی کالاهای سلولزی توسط سلولازها را نام برد.
این عملیات اولین بار در ژاپن تحت عنوان بیوپولیشینگ (1) برای تکمیل پارچه های تاری ـ پودی بکار گرفته شد. این تکمیل خاص پارچه های پنبه ای نبوده و می‌تواند برای پارچه های بافته شده از کتان، رامی و دیگر الیاف سلولزی و مخلوط آنها با الیاف مصنوعی و پروتئینی نیز بکار برده شود.
هیدرولیز آنزیمی منسوجات سلولزی، توسط ایزوآنزیم های سلولاز انجام می‌شود. سلولاز به سیستمی از آنزیم ها اطلاق می‌شود که باهم به صورت زنجیره ای عمل کرده و قادر به شکستن پلیمرهای سلولزی بسیار آرایش یافته هستند. اجزاء سلولاز عبارت از:
الف) اکسو ـ بتا ـ 1و4 ـ گلوکانیز  (E.C.3.2.1.91)
ب) اندو ـ بتا ـ 1و4 ـ گلوکانیز  (E.C.3.2.1.4)
ج) بتا ـ گلوکزایداز  (E.C.3.2.1.21)
می‌باشد (3و2) به طور خلاصه مکانیزم هیدرولیز پلیمرهای سلولزی توسط این آنزیم‌‌ها را می‌توان به این صورت در نظر گرفت که:
    اکسو گلوکانیزها (اکسوسلولازها) واحدهای سلوبیوز را از انتهای غیراحیایی زنجیره‌های سلولزی جدا می‌کنند.
    اندوگلوکانیزها (اندوسلولازها) پیوندهای بتا ـ 1و4 ـ گلوکزایدها را به صورت تصادفی هیدرولیز می‌کنند و سبب کاهش درجه پلیمریزاسیون زنجیره های سلولزی می‌شود.
    بتاگلوکزایدها یا سلوبیازها واحدهای سلوبیوز را به گلوکز تجزیة می‌کنند.
    اگرچه یک همکاری گروهی بین این ترکیبات مشاهده شده است ولی جزئیات نحوة فعالیت آنها کاملاً مشخص نمی‌باشد. (3و2)
سلولاز قابل استفاده در صنعت نساجی از حدود 12 منبع مختلف تهیه می‌شود. دسته‌بندی آنزیم های سلولاز معمولاً باتوجه به محدودهpH آنان صورت می‌گیرد که منظور آن است که در این pH بالاترین فعالیت را دارند و براین اساس آنزیم های سلولاز به سه دسته اسیدی، بازی و خنثی تقسیم می شوند.
آنزیمهای خنثی در pH حدود 7-6 بالاترین فعالیت را داشته و آنزیمهای اسیدی در pH محدوده 5/5-5/4 فعال تر می باشند در حالیکه آنزیم های قلیایی در محیط های قلیایی فعالند. رایج ترین آنزیم های مورد استفاده جهت پارچه های پنبه ای آنزیم‌های اسیدی و خنثی می باشند. آنزیم های قلیایی در مواد شوینده خانگی بکار می روند که به خارج شدن لکه ها و بهبود سطح پارچه بعد از چند بار شستشو کمک می‌کنند.
آنزیم سلولاز در سالهای اخیر در تکمیل منسوجات پنبه ای در جهت کاهش پرزها در پارچه‌های حلقوی و در شستشوی پارچه‌های کتانی به طور وسیع استفاده شده اند. این آنزیم ها در تکمیل های نساجی و در ماشین هایی که در آنها فعالیت مکانیکی وجد دارد مانند جت ها، وینچ ها و ماشین های شستشویی بکار می روند. آن نکته که افزایش فعالیت مکانیکی، شدت هیدرولیز توسط آنزیم را در طول فرآیند هیدرولیز افزایش می‌دهد مورد تاکید قرار گرفته است.

تاثیر تمرین برونگرا در خشکی و آب بر HSP70 و آنزیم های کبدی در دختران ورزشکار

اختصاصی از کوشا فایل تاثیر تمرین برونگرا در خشکی و آب بر HSP70 و آنزیم های کبدی در دختران ورزشکار دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

پایان نامه کارشناسی ارشد تربیت بدنی

گرایش فیزیولوژی ورزشی

78 صفحه

چکیده:

با توجه به اینکه تا کنون تحقیقی با هدف، بررسی تاثیر یک جلسه تمرین در  خشکی و آب بر پروتئین شوک گرمایی( (HSP70 و برخی از آنزیم های کبدی شامل آسپارتات آمینوترانسفراز (AST)، آلانین آمینوترانسفراز (ALT) و آلکالین فسفاتاز (ALT) در دختران ورزشکار  صورت نگرفته است، محققان این پژوهش را انجام دادند . بدین منظور 15 داوطلب از بین زنان کوهنورد که حداقل 16 هفته و هر هفته حداقل 2500 متر صعود داشتند، انتخاب شدند. خون گیری از آزمودنی ها قبل و بلافاصله پس از آزمون ورزشی برونگرا انجام شد. آزمون ورزشی برونگرا به شکل 20 دقیقه پله زدن با شدت 15 گام در دقیقه و با فواصل 5 دقیقه ای انجام  می شد و بین هر دوره 5 دقیقه ای، یک دقیقه استراحت در نظر گرفته شد. آزمودنی ها آزمون را با فاصله زمانی یک هفته در خشکی و آب اجرا کردند. یافته های پژوهش با استفاده از آزمون تحلیل واریانس اندازه گیری مکرر مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج تحقیق حاکی از آن بود که بدنبال اجرای آزمون ورزشی برونگرا در خشکی و آب، تفاوت معناداری در میزان HSP70، ALT، AST وALP مشاهده شد( 05/0 (P≤. در نهایت این پژوهش نشان داد انجام تمرین در آب نسبت به خشکی تفاوت داشته و تا حدودی التهاب را در بدن کاهش می دهد.

کلید کلیدی : آنزیم های کبدی، HSP70، آزمون برونگرا، محیط خشکی و  محیط آب

پایان نامه کلونینگ و بیان ژن آنزیم ال-آسپاراژیناز باکتری E. coli جهش یافته و مقایسۀ خواص این آنزیم با نوع native آن

اختصاصی از کوشا فایل پایان نامه کلونینگ و بیان ژن آنزیم ال-آسپاراژیناز باکتری E. coli جهش یافته و مقایسۀ خواص این آنزیم با نوع native آن دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:124

پایان نامه برای دریافت درجه کارشناسی ارشد(M.Sc.)
گرایش میکروبیولوژی

فهرست مطالب:
چکیده ........................................................................................................................................................ 1
مقدمه ...........................................................................................................................................................3
فصل اول کلیات .................................................................................................................... 5
1-1-پیشینه تاریخی ................................................................................................................................... 6
1-2-آماده سازی ال-آسپاراژیناز قابل استفاده برای درمان ........................................................................ 8
1-3-  آزمایش های بالینی با ال-آسپاراژیناز ............................................................................................ 10
1-4-خصوصیات شیمیایی و داروشناسی این دارو .................................................................................. 12
1-4-1  اثر ضد سرطانی .......................................................................................................................... 12
1-4-2- ترکیبات شیمیایی داروی در دسترس برای درمان ..................................................................... 14
1-4-2-1 آنزیم طبیعی ............................................................................................................................ 14
1-4-2-2-آنزیم تغییریافته ...................................................................................................................... 16
1-5- فارماکوکنتیک ................................................................................................................................ 19
1-5-1- مقاومت دارویی ........................................................................................................................ 23
1-5-2-  تأثیر دارویی .......................................................................................................................... 25
1-6-سمیّت .......................................................................................................................................... 28
فصل دوم روش کار ......................................................................................................... 34
2-1- مواد و میکروارگانیسم ها .............................................................................................................35
2-2- کشت باکتری .............................................................................................................................. 35
2-3- اعمالUV  در زمان های مختلف ................................................................................................ 35
2-4- انجام تست Nesslerization به منظور بررسی مقدار آمونیاک آزاد شده ............................... 36
2-4-1- کشت کلنی ها ....................................................................................................................... 36
2-4-2- تعیین غلظت آمونیاک آزاد شده در محلول واکنش توسط ال-آسپاراژیناز کلنی ها ............... 37
2-4-3- محلول های لازم برای سنجش میزان فعالیت آنزیم ال-آسپاراژیناز کلنی ها ......................... 38
2-5- استخراج  DNA......................................................................................................................... 40
2-5-1- کشت باکتری به منظور استخراج  DNA................................................................................ 40
2-5-2- استخراج DNA ژنومی .......................................................................................................... 41
2-6- واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR)   ........................................................................................... 42
2-7- الکتروفورز بر روی ژل آگارز ................................................................................................. 43
2-8- خالص سازی محصول PCR .................................................................................................. 44
2-9- استخراج پلاسمید ................................................................................................................... 46
2-10- هضم آنزیمی و کلون کردن قطعه در داخل وکتور ............................................................... 47
2-10-1- الگوی برش آنزیمی ژن ال-آسپاراژیناز ll ....................................................................... 47
2-10-2- برش و آماده سازی وکتور pET23a(+) ........................................................................ 48
2-10-3- واکنش الحاق وکتور pET23a(+) با قطعه ژنی ال-آسپاراژینازll  .................................. 48
2-11-ایجاد سلول های Competant و انتقال پلاسمید .............................................................. 49
2-12-انتخاب کلون های مثبت ....................................................................................................... 50
2-13- تأیید کلنی های نوترکیب با PCR و هضم آنزیمی .............................................................. 51
2-13-1-PCR ................................................................................................................................ 51
2-13-2- هضم آنزیمی ................................................................................................................... 52
2-14- بیان و استخراج پروتئین بیان شونده توسط ژن آنزیم ال-آسپاراژیناز ll ............................... 53
2-14-1- القاء بیان پروتئین آنزیمی ال-آسپاراژیناز  ll..................................................................... 53
2-14-2- استخراج پروتئین های آنزیمی ال-آسپاراژیناز ll  و ال-آسپاراژیناز l .............................. 54
2-15- بررسی اولیه بیان پروتئین نوترکیب ال-آسپاراژیناز ll و پروتئین ال-آسپاراژیناز l با SDS-
PAGE  ............................................................................................................................................. 55
 2-16- تعیین فعالیت آنزیمی یا فعالیت کلّی( IU ) آنزیم های ال-آسپاراژیناز  ............................... 58
2-17- تعیین پروتئین کلّی ( mg ) آنزیم های ال-آسپاراژیناز  ........................................................ 59
2-18- تعیین فعالیت ویژه( IU/mg )  آنزیم های ال-آسپاراژیناز  .................................................. 62
2-19- کشت سلول انسانی  ............................................................................................................. 62
2-19-1- تهیه محیط کشت RPMI1640 ..................................................................................... 63
2-20- تاثیر آنزیم ال-آسپاراژیناز ll (نوترکیب)،ال-آسپاراژینازl و آنزیم استاندارد بر سلول های
سرطانی انسانی  ............................................................................................................................... 63
2-20-1- MTT Assay ................................................................................................................ 63
2-21- تست تغییرات سیتوپلاسمی سلول های سرطانی بعد از انجام تست MTT ........................ 65
فصل سوم نتایج ........................................................................................................... 67
3-1- بررسی و شماره گذاری کلنی ها ........................................................................................... 68
3-2- نتایج اعداد جذب محلول های استاندارد سولفات آمونیوم در طول موج nm490 ............... 69
3-3- بررسی اعداد جذب آمونیاک آزاد شده در محلول های به دست آمده از کلنی های جهش
 یافته ................................................................................................................................................ 70
3-4- جداسازی و تکثیر ژن آنزیم ال-آسپاراژیناز ll  ...................................................................... 72
3-5- تعیین توالی قطعه ژنی l-aspsraginase ll  ....................................................................... 74
3-6- وارد کردن قطعه ژنی l-asparaginase ll  در وکتور pET23a و تأیید آن ...................... 76
3-7- نتیجه SDS-PAGE نمونه های آنزیمی ال-آسپاراژیناز ll , l و استاندارد .............................. 79
3-8- محاسبۀ فعالیت آنزیمی(IU)  ال-آسپاراژینازll نوترکیب، ال-آسپاراژینازl و ال-آسپاراژیناز
 استاندارد ......................................................................................................................................... 80
3-9- تعیین پروتئین کلّی (mg) آنزیم های ال-آسپاراژینازll نوترکیب، ال-آسپاراژینازl و ال-
آسپاراژیناز استاندارد ........................................................................................................................ 82
3-10- تعیین فعالیت ویژه( IU/mg )  آنزیم های ال-آسپاراژینازll نوترکیب، ال-آسپاراژینازl و
 ال-آسپاراژیناز استاندارد ................................................................................................................. 84
3-11- بررسی تأثیر آنزیم ال-آسپاراژینازll (نوترکیب)، ال-آسپاراژینازl و آنزیم استاندارد بر سلول
 های سرطانی HeLa  ...................................................................................................................... 85
3-12- بررسی تأثیر آنزیم ال-آسپاراژینازll (نوترکیب)، ال-آسپاراژینازl و آنزیم استاندارد بر سلول
 های سرطانی LCL   ....................................................................................................................... 89
3-13- بررسی تغییرات سیتوپلاسمی سلول های سرطانی بعد از انجام تست MTT ..................... 97
فصل چهارم بحث و پیشنهادات .................................................................................. 98  
منابع ............................................................................................................................................... 108

 
 چکیده
ال- آسپاراژیناز آنزیمی است که موجب هیدرولیز آسپاراژین به اسید آسپاراتیک و آمونیاک می شود . نام دیگر آن ال-آسپار است . این آنزیم امروزه جهت درمان بیماری سرطان خون و برخی تومور ها استفاده می شود. بطور کلی سلولهای سرطانی قادر به سنتز اسید آمینه غیر ضروری آسپاراژین نیستند در حالی که سلولهای نرمال خودشان این اسید آمینه را می سازند لذا سلولهای سرطانی نیازمند به مقادیر بالا از آسپاراژین در حال گردش می باشند . ال- آسپاراژیناز با تجزیۀ ال-آسپاراژین مانع از دسترسی سلولهای سرطانی به منابع این اسیدآمینه می شود . مهمترین اثر جانبی این دارو حالت آلرژی یا واکنش افزایش حساسیت است . هدف ما از این تحقیق 1- تهیه پروتئین آنزیم ال-آسپاراژیناز از باکتری جهش یافته E. coli  . 2- تاثیر این پروتئین بر روی یک رده سلولی سرطانی به منظور ارزیابی فعالیت آن و 3- دستیابی به آنزیم ال-آسپاراژیناز موثرتر ، با کارایی بالا و عوارض جانبی کمتر بوده است. لذا به منظور رسیدن به اهداف فوق مراحل آزمایشگاهی زیر انجام شد: 1- قرار دادن باکتری E. coli در معرض نور UV . 2- تخلیص  DNA و انجام PCR به منظور تکثیر ژن آنزیم. 3- قرار دادن سکانس در داخل پلاسمید  pET23a(+)  و انتقال به E. coli. 4- خالص سازی پروتئین و تعیین مقدار آن. 5-  تاثیر بر روی یک لاین سرطانی و تعیین مقدار تاثیر آن. به این ترتیب بعد از ایجاد جهش و سنجش میزان تولید و فعالیت آنزیم ال-آسپاراژیناز در کلنی های جهش یافته و تخلیص و تکثیر ژن این آنزیم از باکتری هایی که ال-آسپار را بیش از حد معمول تولید می کردند، محصول PCR این ژن ها برای تعیین توالی ارسال گردید و پس از تعیین توالی و مطابقت با بانک ژن بین المللی ncbi ، سکانس قطعه ژنی ال-آسپاراژیناز II  از باکتری E. coli KIAU B1 به عنوان یک سکانس جدید در بانک ژن با کدGenBank: HQ116626.1  به ثبت رسید. ژن مذکور در وکتورpET23a(+)   کلون و سپس پلاسمید نوترکیب حاصل در سلول های E. coli BL21 ترانسفر شد. . از سلول های ترانسفر شده ،پروتئین نوترکیب ال-آسپاراژیناز استخراج شد و پس از سنجش این پروتئین آنزیمی با تست های نسلریزاسیون و برادفورد، میزان فعالیت آنزیمی(IU)  و پروتئین کلّی(mg) آن مشخص و با نمونۀ استاندارد مقایسه شد. همچنین از نظر تأثیر بر سلول های سرطانی HeLa و LCL  ، با نوع استاندارد قیاس شد. نتایج نشان داد که فعالیت ویژه ال-آسپاراژیناز نوترکیب برابر باIU/mg  178 می باشد، در حالی که فعالیت ویژه ال-آسپاراژیناز استانداردIU/mgr  77 به دست آمد. همچنین، آنزیم نوترکیب علاوه بر آن که از نظر سکانس و قدرت آنزیمی با نوع استاندارد تفاوت  نشان می دهد ، نسبت به آن به نحو موثرتری بر رده های سلولی سرطانی  HeLa و LCL  تاثیر می گذارد.
 

مقدمه
با توجه به شیوع روز افزون انواع سرطان به عنوان یکی از مهمترین بیماری های تهدید کنندۀ سلامت انسان، دستیابی به روش های موثرتر در درمان سرطان به ویژه انتخاب ترکیبات دارویی با عوارض جانبی کمتر بیش از گذشته مورد توجه محققین قرار گرفته است.
آنزیم ال-آسپاراژیناز به صورت اختصاصی اسیدآمینه ال-آسپاراژین را به ال-آسپارتات و آمونیاک کاتالیز کرده و نقش مهمی را در متابولیسم همه ارگانیسم های زنده و نیز در داروشناسی بازی می کند(2). دو نوع ترکیب از ال-آسپاراژیناز وجود دارد : ال-آسپاراژیناز l، یک آنزیمconstitutive  داخلی، و ال-آسپاراژیناز ll، یک آنزیم خارجی می باشد. این دو آنزیم از لحاظ بیوشیمیایی و ساختار ژنتیکی متفاوتند. ال-آسپاراژیناز ll به صورت گسترده در سلول های پروکاریوتی و یوکاریوتی وجود دارد و بیش از پنج دهه مورد مطالعه فراوان قرار گرفته است(66). این آنزیم از منابع گوناگون مانند سلول های گیاهی و حیوانی، قارچ ها، مخمرها و باکتری ها جدا شده است(61).
ال-آسپاراژینازll  یک عامل شیمی درمانی مهم می باشد که برای درمان نوعی از اختلالات لنفوپرولیفراتیو و لنفوما، به ویژه لوکمی لنفوبلاستیک حاد یا ALL  بکار برده می شود. این آنزیم بخش اصلی ترکیب پروتوکل های شیمی درمانی است که در درمان ALL  اطفال به مدت تقریباً 30  سال استفاده می شود (6،5،4،3،2،1). بر این اساس، همچنین این آنزیم در جدیدترین رژیم های درمانی چند عاملی برای ALL  بالغین قرار دارد (8،7). ال-آسپاراژیناز به عنوان یک دارو، اثربخشی خود را در درمان و مراحل بعدی استراتژی های مختلف شیمی درمانی اثبات کرده است. بزرگ ترین محدودیت استفاده از ال-آسپاراژیناز حساسیت شدید بالینی در دز اثر بخشی است، که در 78-3 درصد بیماران تحت درمان با فرم های اصلاح نشده آنزیم ظاهر می شود (11،10،9،3). با گذشت بیش از 10 سال به نظر می رسد پگ-ال-آسپاراژیناز به عنوان یک ترکیب جانشین برای ال-آسپاراژیناز ، مشکلات ناشی از انواع ترکیبات طبیعی را اصلاح کرده است (13،12). در این تحقیق سعی بر این شد تا با ایجاد جهش در باکتریKIAU  E. coli ، ارزیابی میزان تولید آنزیم ال-آسپاراژینازll  در سویه جهش یافته، و دستیابی به ترتیب توالی جدید در ژن این آنزیم و کلون کردن آن، بتوان ال-آسپاراژینازی استخراج کرد که از نظر فعالیت ویژه و اختصاصیت در سطح بالاتری نسبت به نوع استاندارد قرار داشته باشد. همچنین با تاثیر این پروتئین آنزیمی بر رده سلولی سرطانی و ارزیابی فعالیت و درصد کشندگی آن بر این سلول ها، بتوان به آنزیم ال-آسپاراژیناز موثرتر، با کارایی بالا و عوارض جانبی کمتر دست یافت.

فصل اول
کلیات

1-1-پیشینه تاریخی
نظریه اولیه که به منظور گسترش ال-آسپاراژیناز به عنوان یک عامل بالقوه آنتی نئوپلاستیک ثابت شد بسیار با اهمیت بوده و توسط Clementi  در سال 1922 طرح شد(20). وی آشکار ساخت که  فعالیت بالای ال-آسپاراژیناز در سرم خوکچه هندی دیده می شود. فعالیت بالای ال-آسپاراژیناز فقط در سرم خوکچه هندی مشاهده می شد، درحالیکه در سایر پستانداران این آنزیم یافت نمی شد. در سال 1953، Kidd عود لنفوماهای پیوندی در موش ها و رت ها را با خوکچه هندی مقایسه کرد و شرح داد(39). این فعالیت سایتوتوکسیک در سرم اسب یا خرگوش وجود نداشت. Neuman و McCoy  در سال 1956 این نظریه ها را گسترش دادند(45). آنها ثابت کردند که رشد لاین سلولی که از کارسینوسارکومای Walker مشتق شده مستلزم ال-آسپاراژین است. Haley در سال 1961 با استفاده از لاین سلولی مربوط به لوکمی موش نتایج مشابهی بدست آورد (29). و بالاخره Broome بود که در سال 1961 درحالیکه در آزمایشگاه Kidd کار می کرد ، یافته های Kidd مربوط به مهار رشد را با اولین نظریه که توسط Clementi ارائه شد مقایسه کرد و با موفقیت نتیجه گرفت که فعالیت آنتی لنفوما در سرم های خوکچه های هندی ناشی از ال-آسپاراژیناز موجود در سرم این حیوان می باشد (12).  تحقیقات بیشتر این شخص خصوصیت نهفته درمانی این آنزیم را تایید کرد (12،11). Yellin   وWriston   در سال 1966، موفق به خالص سازی جزئی دو ایزوفرم ال-آسپاراژیناز از سرم خوکچه هندی شدند (63). بطور قابل توجه ، فقط یک ایزوفرم در شرایط in vivo  فعالیت آنتی لنفوما را آشکار می ساخت (64،63) .
از آنجاییکه استخراج این آنزیم به مقادیر کافی از سرم خوکچه هندی مشکل بود ، سایر منابع نظیر میکروبها بررسی شدند. Mashburn و Wriston ، در سال 1964  و Campbell و Mashburn در سال 1969 از خالص سازی ال-آسپاراژیناز E. coli  خبر دادند، و ثابت کردند که فعالیت تومورکشی آن شبیه به نوع سرمی خوکچه هندی می باشد(64،15).  این یافته ها پایه عملی تولید آنزیم با مقادیر زیاد را برای تحقیقات بالینی و پیش بالینی فراهم کرد(17،16،15) . Oettgen در سال 1967 اولین کسی بود که تأثیر ال-آسپاراژیناز در انسان های مبتلا به لوکمی را نشان داد (46). بطور همزمان بررسی مهم دیگری توسط Old  انجام شد که فعالیت آنتی توموری این آنزیم را در شرایط in vivo در یک مدل سگی مبتلا به لنفوسارکوما  اثبات می کرد(47).
درمان  با استفاده از پروتئین ها در انسان ها محدودیت دارد زیرا منجر به ایمنی زایی دارو می شود که مشکلی اساسی می باشد. واکنش های حساسیت شدید نسبت به ال-آسپاراژیناز E. coli  بطور متوسط عمومیت دارد. یک بررسی هم زمان بر روی ال-آسپاراژیناز E. coli و Erwinia carotovora  فقدان واکنش تقاطعی را نشان می دهد (24). هرچند هردو آنزیم به میزان زیادی  سبب تحریک سیستم  ایمنی می گردند. تلاش ها در این زمینه موجب کاهش ایمنی زایی این دارو ها شده است و این در حالیست که فعالیت آنزیمی آن حفظ شده است. مشخص شده است اتصال این آنزیم به  پلی اتیلن گلایکل یا PEG  به عنوان یک پردازش، واکنش های ایمنی زایی این دارو را از بین می برد بدون آنکه در ویژگی آنتی نئوپلاستیک آن تغییر ایجاد کند(27). این ترکیب اصلاح شده دارو در مدل های حیوانی باعث کاهش تشکیل آنتی بادی در مقایسه با ترکیب بومی آن می شود، و بطور محسوس مدت اثرش را طولانی می کند(57،27). در سال های اخیر، استفاده از ال-آسپاراژیناز در درمان لوکمی و سایر اختلالات لنفوپرولیفراتیو بطور وسیع افزایش یافته است. در اوایل از آن تنها برای  بهبود  بیماران مبتلا به ALL استفاده می شد (36،35،34،33،32،31،30،2،1)؛ اما پس از  تحقیقات اخیر به منظور تقویت درمان بدخیمی های لنفوئید، عملکرد این آنزیم را به مدت 30-20 هفته تجویز می گردد(57) . به این دلایل است که ال-آسپاراژیناز به عنوان یک جزء ضروری در روش های نوین شیمی درمانی چند دارویی قرار گرفته است.

پایان نامه رشته نساجی تأثیر آنزیم بر روی کالاهای رنگرزی شده با رنگ مستقیم

اختصاصی از کوشا فایل پایان نامه رشته نساجی تأثیر آنزیم بر روی کالاهای رنگرزی شده با رنگ مستقیم دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

دانلود پایان نامه رشته نساجی تأثیر آنزیم بر روی کالاهای رنگرزی شده با رنگ مستقیم با فرمت ورد و قابل ویرایش تعداد صفحات 65

دانلود پایان نامه اماده

مقدمه

همگام با رشد فزایندة استفاده از فرآیندهای بیوتکنولوژی در صنعت، استفاده از آنزیم‌ها در صنایع نساجی نیز گسترش چشمگیری داشته است. به عنوان مهمترین نمونه از این موارد می‌توان هیدرولیز کتنرل شده آنزیمی کالاهای سلولزی توسط سلولازها را نام برد.این عملیات اولین بار در ژاپن تحت عنوان بیوپولیشینگ (1) برای تکمیل پارچه های تاری ـ پودی بکار گرفته شد. این تکمیل خاص پارچه های پنبه ای نبوده و می‌تواند برای پارچه های بافته شده از کتان، رامی و دیگر الیاف سلولزی و مخلوط آنها با الیاف مصنوعی و پروتئینی نیز بکار برده شود.هیدرولیز آنزیمی منسوجات سلولزی، توسط ایزوآنزیم های سلولاز انجام می‌شود. سلولاز به سیستمی از آنزیم ها اطلاق می‌شود که باهم به صورت زنجیره ای عمل کرده و قادر به شکستن پلیمرهای سلولزی بسیار آرایش یافته هستند. اجزاء سلولاز عبارت از:

الف) اکسو ـ بتا ـ 1و4 ـ گلوکانیز[1] (E.C.3.2.1.91)

ب) اندو ـ بتا ـ 1و4 ـ گلوکانیز[2](E.C.3.2.1.4)

ج) بتا ـ گلوکزایداز[3] (E.C.3.2.1.21)

[1] . exo-b-1.4.glucanases

[2] . enddo -b - 1.4. glucanases

[3] . b.glucosidases

فهرست مطالب
عنوان     صفحه
فصل اول : مقدمه     
1-1)  مقدمه     
1-2) اهداف پروژه     
1-3) اهمیت پروژه    
1-4) کارهای انجام شده قبل    
1-4-1) هیدرولیز آنزیمی سلولز و عوامل مؤثر در شدت هیدرولیز    
1-4-2) اثر آنزیم سلولاز بر رنگ پذیری الیاف سلولزی    
1-4-3) تأثیر رنگ به کار رفته روی پارچه در شدت هیدرولیز آنزیمی    
فصل دوم: تجربیات     
1-2) مواد مورد استفاده    
2-2) وسایل مورد استفاده     
2-3) روش انجام آزمایشات    
2-3-1) رنگرزری پارچه های پنبه ای قبل از هیدرولیز آنزیمی    
2-3-2) هیدرولیز آنزیمی پارچه های پنبه ای قبل از رنگرزی    
فصل سوم: نتایج و بحث    
فصل چهارم: نمونه ها    
فصل پنجم: مقالات لاتین    

پایان نامه فراوانی نسبی آنزیم متالوبتالاکتاماز درسویه‌های سودوموناس ائروژینوزای جدا شده از نمونه‌های بالینی در شهر یزد

اختصاصی از کوشا فایل پایان نامه فراوانی نسبی آنزیم متالوبتالاکتاماز درسویه‌های سودوموناس ائروژینوزای جدا شده از نمونه‌های بالینی در شهر یزد دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:99

پایان نامه برای دریافت درجه دکترای عمومی

عنوان :  فراوانی نسبی آنزیم متالوبتالاکتاماز درسویه‌های سودوموناس ائروژینوزای جدا شده از نمونه‌های بالینی در شهر یزد به روش  E Test

فهرست مطالب:
عنوان    صفحه
فصل اول: مقدمه و مروری بر مطالعات مشابه    1
1-1- خانواده پسود و موناداسه آ    2
1-2- تاریخچه P. aeruginosa    3
1-2-1- خصوصیات مورفولوژیک P. aeruginosa    5
1-2-2- خصوصیات رشد    5
1-2-3- هوازی‌های اجباریObligate aerobes    5
1-2-4- مشخصات کشت    6
1-2-5- مواد آلی مورد نیاز    7
1-2-6- محیط‌های کشت    8
1-2-7- پیگمان    9
1-2-8- شاخص‌های بیماریزایی در P. aeruginosa    11
1-2-8-1- پیلی(Pili)    11
1-2-8-2- آلژینات (Alginate)    12
1-2-8-3- اندوتوکسین    12
1-2-8-4- پروتئاز‌های خارج سلولی    13
1-2-8-5- همولیزین‌ها    15
1-2-8-6- فسفولیپاز ‍C    15
1-2-8-7- رامنولیپیدها    15
1-2-9- توکسین‌های خارج سلولی    16
1-2-9-1- اگزوتوکسینA    16
1-2-9-2- اگزوآنزیم S    16
1-2-10- لوکوسیدین با وزن ملکولی بالا    17
1-2-11- سیدروفورها     17
1-2-12- لیپاز     17
1-2-13- سیتوتوکسین     18
1-2-14- پایوسیانین           18
1-2-15- سیستم ترشحی نوع III    18
1-2-16- اپیدمیولوژی    19
1-2-17- بیماریهای ناشی از P. aeruginosa    20
1-2-17-1- باکتریمی    20
1-2-17-2- عفونت‌های گوش    20
1-2-17-3- عفونت‌های چشم    21
1-2-17-4- عفونت‌های مجرای تنفسی    21
1-2-17-5- عفونت‌های استخوان و مفصل    22
1-2-17-6- عفونت‌های سیستم عصبی مرکزی    22
1-2-17-7- عفونت‌های دستگاه گوارش    22
1-2-17-8- عفونت‌های پوست و بافت نرم    23
1-2-17-9- عفونت‌های دستگاه ادارای    24
1-2-17-10- باکتریمی    24
1-2-17-11- عفونتهای استخوان و مفصل    24
1-2-17-12- عفونت‌های سیستم عصبی مرکزی    24
1-2-17-13- اندوکاردیت عفونی    25
1-2-17-14- عفونت‌های مجرای تنفسی    25
1-2-17-15- عفونت پوست و بافت‌های نرم    26
1-2-17-16- عفونت‌های ادراری    26
1-2-18- متالوبتالاکتاماز    27
1-2-19- شیوع مقاومت متالوبتالاکتامازها    27
1-2-20- انواع  تیپ‌های متالوبتالاکتاماز    28
1-2-21- The Imipenemase(IMP) Type    28
1-2-22- The Veronese Imipenemase (VIM) Type    28
1-2-23- New Delhi Metalo β-lactamase-1 (NDM-1) Type    28
1-2-24-  دیگر تیپ‌های متالوبتالاکتاماز    29
1-2-24-1- روش‌های تشخیص متالوبتالاکتاماز    29
1-2-24-2- سنجس حساسیت) آنتی بیوگرام)    29
1-2-24-3- روش E.Test به وسیله نوار    MBL    30
مروری بر مطالعات گذشته    31
فصل دوم: مواد و روش‌ها    34
2-1 بیان مسئله و اهمیت موضوع    35
2-2- اهداف    36
2-2-1- اهداف اصلی طرح    36
2-2-2- اهداف ویژه طرح    36
2-3- سؤالات و فرضیات    36
2-4- نوع و روش مطالعه    37
2-5- روش کار    37
2-5-1- انواع محیط کشت    37
2-5-2- مکانکی آگار(Mac Conkey agar)    37
2-5-3- محیط کشت  SIM    38
2-5-4- روش آماده سازی معرف کواکس جهت تست اندول    39
2-5-5- محیط کشت OF    39
2-5-6- محیط کشت TSI    39
2-5-7- محیط سیمون سیترات    40
2-5-8- محیط مایع( ( MR-VP    40
2-5-9- طرز تهیه معرف VP    41
2-5-10- طرز تهیه معرف MR    41
2-5-11- تست اکسیداز    41
2-6- روش اجرای کار    42
2-6-1- جمع آوری نمونه‌ها    42
2-6-2- تعیین آنزیم متالوبتالاکتاماز    43
2-6-3- آنالیز آماری    44
2-6-4- محدودیت و مشکلات اجرایی طرح    44
2-7- جدول متغیرها    45
فصل سوم: یافته‌ها    46
3-1- نتایج    47
فصل چهارم: بحث، نتیجه گیری و پیشنهادات    69
4-1- بحث    70
4-2- نتیجه گیری    75
4-3- پیشنهادات    75
ABSTRACT    76
فهرست مراجع    77
ضمیمه: پرسشنامه    84
 
فهرست جدول‌ها
عنوان    صفحه
جدول1-1- طبقه بندی بعضی از جنس‌های  خانواده پسودوموناسه آ که از نظر طبی اهمیت دارند [5].    3
جدول 3-1- فراوانی نسبی آنزیم متالوبتالاکتاماز در نمونه‌های مورد بررسی به روش E.Test    52
جدول 3-2- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب نوع نمونه    53
جدول 3-3- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب بخش    54
جدول 3-4- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب سن    55
جدول 3-5- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب جنس    56
جدول 3-6- فراوانی نسبی مقاومت سویه‌های سودوموناس ائروژینوزا به آنتی بیوتیک‌های مختلف به روش دیسک دیفیوژن    57
جدول 3-7- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به جنتامایسین    58
جدول 3-8- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به کوتریموکسازول    59
جدول 3-9- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به سیپروفلوکساسین    60
جدول 3-10- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به سفتریاکسون    61
جدول 3-11- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به سفپیم    62
جدول 3-12- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به سفوتاکسیم    63
جدول 3-13- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به سفتازیدیم    64
جدول 3-14- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به پیپراسیلین    65
جدول 3-15- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به تیکارسیلین    66
جدول 3-16- فراوانی نسبی آنزیم MBL در نمونه‌های مورد بررسی بر حسب مقاومت به ایمی پنم    67

 
فهرست شکل‌ها
عنوان    صفحه
شکل 3-1- نوار E.Test جهت تعیین آنزیم متالوبتالاکتاماز    68

چکیده
مقدمه و هدف: متالوبتالاکتامازها (MBL) آنزیم‌هایی هستند که توسط باسیل‌های گرم منفی غیر تخمیری مانند سودوموناس آئروژینوزا تولید شده و این سویه‌ها را نسبت به کارباپنم مقاوم می‌سازد در نتیجه سودوموناس‌های حامل ژنهای متالوبتالاکتاماز یک تهدید کلینیکی جدی بشمار می‌آیند. با توجه به اینکه مقاومت در گونه باکتریایی سودوموناس آئروژینوزا به واسطه داشتن متالوبتالاکتامازها در برابر آنتی بیوتیک‌ها رو به افزایش بوده و در کشورها، مناطق و حتی بیمارستان‌های مختلف شیوع آن‌ها متفاوت می‌باشد بر آن شدیم تا شیوع این آنزیم را در نمونه‌های جمع آوری شده از بیمارستان‌های آموزشی یزد با استفاده از روش E Test بررسی کنیم.
مواد و روش‌ها: جامعه مورد بررسی سویه‌های سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از بیمارستان‌های دانشگاهی استان یزد در سال‌های 92-91 می‌باشد. این مطالعه از نوع مطالعه ای توصیفی-تحلیلی از نوع مقطعی می‌باشد و ایزوله‌های سودوموناس با استفاده از آزمایشات بیوشیمیایی تعیین هویت گردیده و سنجش حساسیت به آنتی بیوتیک‌ها به روش دیسک دیفیوژن انجام شده و جهت تایید وجود آنزیم MBL در سویه‌ها از روش  E.  Testاستفاده شد .
نتایج: در این مطالعه 100 نمونه سودوموناس آئروژینوزا مورد بررسی قرار گرفت.31 نمونه(31 درصد) از کل نمونه‌ها مولد متالوبتالاکتامازها بودند. بین بازه های سنی ، جنس و نوع بخش باتولید MBL توسط ایزوله های سودوموناس آئروژینوزا  ارتباط معنی داری وجود نداشت (P.value> 0.05). فراوانی این آنزیم بترتیب در ایزوله های جدا شده از نمونه های زخم سوختگی(3/56 درصد)، ادرار(4/36 درصد)، ترشح خلط(2/22 درصد) ،  خون و کاتتر(04/19 درصد) و زخم(7/16 درصد) مشاهده شد. ارتباط معنی داری بین نوع نمونه و تولید انزیم متالوبتالاکتاماز دیده نشد. سویه‌های سودوموناس آئروژینوزا بیشترین مقاومت را به ترتیب نسبت به کوتریموکسازول(85 درصد)، سفتازیدیم(83 درصد) و سفوتاکسیم(79 درصد) نشان دادند. همچنین بیشترین حساسیت سویه‌های سودوموناس آئروژینوزا به آنتی بیوتیک‌های سیپروفلوکساسین(55 درصد)، جنتامایسین(52 درصد) و پیپراسیلین(41 درصد)داشتند.
نتیجه گیری: در این مطالعه بین سن و جنس و نوع بخش با فراوانی آنزیم متالوبتالاکتامازها ارتباط معناداری یافت نشد. بیشترین فراوانی این آنزیم در نمونه‌های  زخم سوختگی و در  بخش سوختگی به دست آمد. بیشترین مقاومت آنتی بیوتیکی به ترتیب به کوتریموکسازول ، سفتازیدیم و سفوتاکسیم و بیشترین حساسیت به سیپروفلوکساسین، جنتامایسین و پیپراسیلین بود. نتایج نشان دادکه این ایزوله ها  علاوه بر کارباپنم ها نسبت به بسیاری از آنتی بیوتیک ها بخصوص سفاسپورین ها مقاوم هستند، لذا لازم است قبل از شروع درمان سنجش حساسیت انتی بیوتیکی و غربالگری این آنزیم  انجام شود.
واژه‌های کلیدی:  سودوموناس آئروژینوزا، مقاومت آنتی بیوتیکی، متالوبتالاکتاماز( ( MBL