فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)
تعداد صفحات:70
پایان نامه کارشناسی ارشد
رشته شیلات گرایش تکثیر و پرورش آبزیان
عنوان : اثر چند شکلی های ژن GH بر صفات رشد در ماهی سفید دریای خزر -Rutilus kutum- و کپور معمولی -Cyprinus carpio- به روش PCR-SSCP
فهرست مطالب:
شماره صفحه عنوان
فصل اول 1
مقدمه و کلیات 1
1-1 مقدمه 2
1-2 ژنهای کاندیدا و اهمیت آنها 4
فصل دوم 5
بررسی منابع 5
2-1 مروری کوتاه بر خصوصیات بیولوژیکی و زیستگاهی ماهیان مورد مطالعه 6
2-1 کپور شکلان 6
2-1-1 خانواده کپور ماهیان 6
2-1-1-1 ماهی سفید 7
2-1-1-2 کپور معمولی 8
2-2 زیستگاه 9
2-3 تغذیه 10
2-4 سن بلوغ 10
2-5 رشد و عوامل موثر بر آن 10
2-5-1 تنظیم رشد 11
2-5-2 هورمون رشد 11
2-5-3 کنترل ترشح هورمون رشد 12
2-5-4 اثرات متابولیکی هورمون رشد 12
2-5-4-1 افزایش سرعت پروتئین سازی در بیشتر سلولهای بدن 12
2-5-4-2 افزایش رونویسی هستهای DNA برای ساخت RNA 13
2-5-4-3 افزایش میزان چربیها برای تولید انرژی 13
2-5-4-4 کاهش مصرف کربوهیدراتها 13
2-6 ژن هورمون رشد 13
2-7 نشانگرهای ژنتیکی 14
2-7-1 نشانگرهای ریخت شناسی 15
2-7-2 نشانگرهای فیزیولوژیکی 15
2-7-3 نشانگرهای سیتوژنتیکی 15
2-7-4 نشانگرهای پروتئینی 15
2-7-5 نشانگرهای DNA یا نشانگرهای مولکولی 16
2-8 نشانگرهای DNA مبتنی بر واکنش زنجیرهای پلیمراز 16
2-9 واکنش رنجیره ای پلیمراز (PCR) 17
2-9-1 بافر RCR 18
2-9-2 کلرید منیزیم (Mgcl2) 18
2-9-3 دی اکسی نوکلئوتیدها (dNTPs) 18
2-9-4 آنزیم تک پلیمراز 19
2-9-5 آغازگرها 19
2-10 چند شکلی فضایی رشتههای منفردSSCP) ) 19
2-11 مروری بر برخی پژوهشهای انجام شده: 20
فصل سوم 22
مواد و روشها 22
3-1 نمونه برداری 23
3-2 بررسی فاکتور وضعیت 23
3-3 استخراج DNA به روش نمکی بهینه یافته 23
3-3-1 طرز تهیه بافرهای استخراج DNA 23
3-4 تعیین ویژگیهای کمی و کیفی DNA استخراج شده: 24
3-4-1 ژل آگارز 24
3-4-2 رنگ آمیزی ژل آگارز 25
3-5 تعیین غلظت DNA استخراج شده با استفاده از اسپکتوفتومتر 26
3-6 واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR) 26
3-6-1 پروتکل و مواد استفاده شده در PCR 26
3-6-2 مراحل PCR 27
3-6-3 تنظیم سیکلهای حرارتی PCR 28
3-6-3-1 واسرشته سازی قطعه الگو 28
3-6-3-2 اتصال آغازگرها: 28
3-6-3-3 بسط (طویل سازی) آغازگرها: 28
3-7 چندشکلی فضایی در تک رشته DNA (SSCP) 29
3-8 الکتروفورز محصولات SSCP روی ژل اکریل آمید 30
3-8-1 تهیه ژل پلی اکریل آمید 30
3-8-2 آماده سازی دستگاه الکتروفورز عمودی 31
3-8-3 رنگ آمیزی با نیترات نقره 32
3-8-3-1 مراحل انجام رنگ آمیزی نیترات نقره: 32
3-9 مراحل انجام کار 33
3-10 تعیین توالی الگوهای باندی مشاهده شده در جمعیت مورد مطالعه 34
3-11 تجزیه تحلیل دادهها 34
3-11-1 تجزیه و تحلیل آماری ژنتیک جمعیت و ارتباط نشانگر- صفت 34
3-11-2 تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک توالیهای به دست آمده 35
فصل چهارم 36
نتایج 36
4-1 بررسی کمیت و کیفیت DNA استخراج شده 37
4-2 تکثیر قطعات مورد نظر 37
4-2-1 ژن GH-2 ماهی سفید 37
4-2-2 ژن GH-1 ماهی کپور معمولی 38
4-3 الگوهای باندی مشاهده شده جایگاه GH 38
4-3-1 ژن GH-2 ماهی سفید 38
4-3-1-1 بررسی فاکتور وضعیت ماهی سفید 39
4-3-1-2 بررسی ارتباط بین نشانگر- صفت در جایگاه GH-2 ماهی سفید 39
4-3-2 ژن GH-1 ماهی کپور معمولی 40
4-3-2-1 بررسی فاکتور وضعیت کپور معمولی 41
4-3-2-2 بررسی ارتباط بین نشانگر- صفت در جایگاه GH-1 ماهی کپور معمولی 41
4-5 تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک 42
4-5-1 توالی یابی 42
4-5-2 مقایسه توالی GH-2 ماهی سفید و ماهی کپور معمولی 43
4-6 تعیین ژنوتیپ الگوهای باندی جایگاه GH-2 ماهی سفید پس از توالییابی 47
4-7 برآورد مقدار وفور ژنی و ژنوتیپی جایگاه GH-2 ماهی سفید 48
فصل پنجم 50
بحث و نتیجه گیری 50
5-1 بحث و نتیجه گیری 51
5-2 پیشنهادات 53
منابع 54
پیوستها: 60
فهرست اشکال و جداول و نمودارها
شماره صفحه عنوان
شکل 2-1 ماهی سفید 8
شکل 2-2 کپور معمولی 9
شکل 3-1 دستگاه الکتروفورز افقی 25
جدول 3-1 اجزای تشکیل دهنده بافر بارگذاری 26
جدول 3-2 مواد استفاده شده در واکنش زنجیرهای پلیمراز 27
شکل 3-2 دستگاه ترموسایکلر 27
جدول 3-3 توالی آغازگر اختصاصی برای جایگاه GH 28
جدول 3-4 دماهای استفاده شده در سیکلهای PCR (درجه سانتیگراد) 29
جدول 3-5 زمانها و تعداد سیکلهای استفاده شده در PCR 29
جدول 3-6 مواد لازم جهت تهیه بافر بارگیری SSCP 30
جدول 3-7 مواد لازم برای تهیه 65 میلی لیتر ژل اکریل آمید 31
جدول 3- 8 مواد لازم جهت تهیه محلول ثابت کننده 32
جدول 3-9 مواد لازم جهت تهیه محلول رنگآمیزی 32
جدول 3-10 مواد لازم جهت تهیه محلول ظاهرسازی 33
شکل 4-1 نمونههای از DNA استخراج شده به روش نمکی بهینه یافته 37
شکل 4-2 محصولات PCR یک قطعه از ناحیه اگزون 4، اینترون 4 و اگزون 5 برای ژن GH-2 در ماهی سفید 37
شکل 4-3 محصولات PCR یک قطعه از ناحیه اگزون 4، اینترون 4 و اگزون 5 برای ژن GH-2 در ماهی کپور معمولی 38
شکل 4-4 نمونهای از باندهای SSCP ژن GH-2 ماهی سفید 38
جدول 4-1 فراوانی الگوهای باندی مشاهده شده در نمونههای مطالعه شده 39
جدول 4-2 بررسی فاکتور وضعیت ژنوتیپ های مشاهده شده در ماهی سفید 39
جدول 4-3 جدول ANOVA و آنالیز آماری GLM برای ماهی سفید 39
جدول 4-4 نتایج مقایسه میانگین حداقل مربعات الگوهای باندی مختلف برای صفت فاکتور وضعیت ماهی سفید 40
شکل 4-5 هشت الگوی باندی مشاهده شده در جایگاه ژن GH-1 ماهی کپور معمولی 40
جدول 4-5. فراوانیهای ژنوتیپی جایگاه ژنی GH-1 مشاهده در 150 نمونه ماهی کپور مطالعه شده 40
جدول 4-6 بررسی فاکتور وضعیت ژنوتیپ های مشاهده شده در ماهی کپور معمولی 41
جدول 4-7 جدول ANOVA و آنالیز آماری GLM برای ماهی کپور معمولی 41
جدول 4-8 نتایج مقایسه میانگین حداقل مربعات الگوهای باندی مختلف ژن GH-1 برای صفت وزن ماهی کپور معمولی 42
شکل 4-6 مقابسه توالیها بین نمونههای ماهی سفید با ژنوتیپ دارای الگوهای باندی A، B و C 43
شکل 4-7 هم ترازی سه نمونه ارسال شده ماهی سفید برای توالی یابی. 44
نمودار 4-1 نتایج حاصل از توالییابی ماهی سفید 47
نمودار 4-2 هتروزیگوتی الگوی باندی A و C. 48
جدول 4-9 فراوانی ژنوتیپهای مشاهده شده و مورد انتظار در جایگاه GH-2 ماهی سفید 48
جدول 4-10 فراوانی ژنوتیپی و آللی جایگاه GH-2 ماهی سفید 49
چکیده
هورمون رشد (GH) مهمترین هورمون کنترل کننده رشد سلولهای سوماتیک و موثر در سنتز پروتئین، چربی و کربوهیدراتها میباشد. هدف از پژوهش حاضر شناسایی چند شکلیهای ژن GH-1در ماهی کپور معمولی و GH-2 در ماهی سفید با استفاده از تکنیک PCR-SSCP و ارتباط آن با صفات مرتبط به رشد (فاکتور وضعیت، طول و وزن بدن) بوده است. تعداد 150 قطعه ماهی کپور در 4 گروه سنی 4، 6، 12و 24 ماهه و 150 قطعه ماهی سفید در سن 3 ماهگی به طور تصادفی انتخاب و از باله دمی برای استخراج DNA استفاده شد. پس از استخراج DNA به روش نمکی بهینه یافته، دو قطعه به اندازه 373 و 410 جفت باز به ترتیب برای جایگاههای ژنی GH-1در ماهی کپور معمولی و GH-2 در ماهی سفید تکثیر و تعیین ژنوتیپ افراد به روش SSCPانجام گرفت. در نمونههای مورد مطالعه 8 الگوی باندی متفاوت A، B، C، D، E، F، G و H در جمعیت کپور ماهیان بهترتیببافراوانیهای 33/31، 67/10، 67/20، 67/22، 4، 2، 67/2 و 6 درصد و 3 الگوی باندی متفاوت A، B و C به ترتیب با فراوانی 67/24، 67/58 و 67/16 درصد در جمعیت ماهی سفید مشاهده شد. تجزیه و تحلیل نشانگر- صفت ارتباط معنی دار آماری بین ژنوتیپ های مختلف ژن GH-2 ماهی سفید با صفات وزن، طول بدن و فاکتور وضعیت وجود ندارد. همچنین بین ژن GH-1 ماهی کپور در سه گروه سنی 4 ماه، 6 ماه و 12 ماه با صفت وزن ارتباط معنی دار آماری (05/0>P) وجود دارد در حالی که با صفات طول و فاکتور وضعیت ارتباط معنی داری مشاهده نشد. آزمون چند دامنهای دانکن برای جمعیت ماهیان کپور معمولی در سه گروه سنی 4 ماه، 6 ماه و 12 ماه نشان داد که ماهیان با ژنوتیپ دارای الگوی باندی D به طور معنی داری (05/0>P) دارای وزن بیشتری نسبت به سایر ژنوتیپ ها بودند. همچنین آزمون چند دامنهای دانکن برای ماهی سفید نشان داد که افراد با ژنوتیپ C،CF بالاتری (05/0>P) نسبت به افراد با ژنوتیپ A داشتند. از نظر صفات وزن و طول در داخل جمعیت ماهیان سفید، هیچ کدام از ژنوتیپ ها با یکدیگر اختلاف معنی دار نداشتند. نتایج تعیین توالی قطعه تکثیری در ماهی سفید نشان داد که در الگوی باندیC، نه SNP به صورت تغییرنوکلوتیدیT به G در موقعیت 82 جفت بازی، A به C در موقعیت 113 جفت بازی، G به A در موقعیت 207 جفت بازی، G به A در موقعیت 254 جفت بازی، G به A در موقعیت 269 جفت بازی، G به A در موقعیت 296 جفت بازی، A به G در موقعیت 307 جفت بازی، C به A در موقعیت 308 جفت بازی و G به A در موقعیت 346 جفت بازی رخ داده است. همچنین در موقعیت 366 جفت بازی در الگوی باندی B یک جهش از نوع حذف مشاهده شد. مشاهده هشت الگوی باندی مختلف در جایگاه مورد مطالعه در این پژوهش نشان دهنده تنوع زیاد در جایگاه ژنی GH-1 در جمعیت ماهیان کپور معمولی میباشد. بنابراین با توجه به اهمیت اقتصادی ماهی کپور معمولی و ماهی سفید در صنعت پرورش و وجود همبستگی بین چندشکلیهای مشاهده شده و صفات رشد احتمالا بتوان از این جایگاه نشانگری در برنامههای اصلاح نژادی در جمعیتهای مورد مطالعه بهره برد. به هر حال جهت دست یابی به نتایج مطمئن نیاز به تکرار آزمون با تعداد نشانگر بیشتر از این جایگاههای ژنی و اندازه نمونههای بزرگتر از این جمعیتها میباشد.
کلمات کلیدی: ژن GH، کپور معمولی، ماهی سفید، PCR-SSCP
پس از آنکه اسیدهای نوکلئیک بوجود آمدند، احتمال میرود که پیدایش جانداران جدید با سرعت بسیار زیادتری انجام گرفته باشد. این شتاب عظیم را ژنها ، که القاب کنونی اسیدهای نوکلئیک هستند امکانپذیر ساختهاند. اکنون جانداران بر طبق دستورالعملهایی که ژنهایشان فراهم میآورند، به تولید مثل میپردازند و به سبب اینکه نسلهای متوالی جانداران ، ژنها را به ارث میبرند. پدید آمدن یک جاندار جدید به صورت فرایندی کنترل شده و غیر تصادفی درآمده است. آنچه جاندار به ارث میبرد تا حد زیادی بقای او را تعیین میکند، بنابراین وراثت از نظر سازگاری جانداران حائز اهمیت است.
اما چیزی که جانداران به ارث میبرند، ماهیچه نیرومند ، برگ سبز ، خون قرمز یا مانند آن نیست، بلکه ژنها و دیگر محتویات سلولهای زاینده است. سپس در فردی که از این سلولها ناشی میشود، صفات قابل رویت تحت نظارت ژنهایی که به ارث برده است، پدید میآید. محصول این گونه وراثت موجود زنده منحصر به فردی است که در بعضی از صفات کلی خود به والدینش شباهت دارد و در بسیاری از صفات جزئی با آنها تفاوت دارد. اگر این تفاوتها کشنده نباشند یا سبب عدم باروری نشوند، جاندار حاصل میتواند زنده بماند و ژنهای خود را به نسلهای بعدی انتقال دهد.
«ویلیام هاروی» ، در سال 1651 ، این نظریه را بیان کرد که تمام موجودات زنده از جمله ، انسان ، از تخم بوجود آمدهاند و اسپرم فقط فرایند تولید مثل نقش دارد. هاروی همچنین تئوری اپیژنز را ارئه داد که طبق این تئوری در مرحله رشد جنینی ، ارگانها و ساختمانهای جدیدی از ماده زنده تمایز نیافته ، بوجود میآید. پژوهشهای جدید درباره وراثت بوسیله گرگور مندل که کشیشی اتریشی بود، در نیمه دوم قرن 19 آغاز شد. وی دو قانون مهم را کشف کرد که همه پیشرفتهای بعدی علم وراثت بر پایه آنها بنا نهاده شده است.
شامل 50 صفحه فایل word
پس از آنکه اسیدهای نوکلئیک بوجود آمدند، احتمال میرود که پیدایش جانداران جدید با سرعت بسیار زیادتری انجام گرفته باشد. این شتاب عظیم را ژنها ، که القاب کنونی اسیدهای نوکلئیک هستند امکانپذیر ساختهاند. اکنون جانداران بر طبق دستورالعملهایی که ژنهایشان فراهم میآورند، به تولید مثل میپردازند و به سبب اینکه نسلهای متوالی جانداران ، ژنها را به ارث میبرند. پدید آمدن یک جاندار جدید به صورت فرایندی کنترل شده و غیر تصادفی درآمده است. آنچه جاندار به ارث میبرد تا حد زیادی بقای او را تعیین میکند، بنابراین وراثت از نظر سازگاری جانداران حائز اهمیت است.
اما چیزی که جانداران به ارث میبرند، ماهیچه نیرومند ، برگ سبز ، خون قرمز یا مانند آن نیست، بلکه ژنها و دیگر محتویات سلولهای زاینده است. سپس در فردی که از این سلولها ناشی میشود، صفات قابل رویت تحت نظارت ژنهایی که به ارث برده است، پدید میآید. محصول این گونه وراثت موجود زنده منحصر به فردی است که در بعضی از صفات کلی خود به والدینش شباهت دارد و در بسیاری از صفات جزئی با آنها تفاوت دارد. اگر این تفاوتها کشنده نباشند یا سبب عدم باروری نشوند، جاندار حاصل میتواند
زنده بماند و ژنهای خود را به نسلهای بعدی انتقال دهد.
ویلیام هاروی ، در سال 1651 ، این نظریه را بیان کرد که تمام موجودات زنده از جمله ، انسان ، از تخم بوجود آمدهاند و اسپرم فقط فرایند تولید مثل نقش دارد. هاروی همچنین تئوری اپیژنز را ارئه داد که طبق این تئوری در مرحله رشد جنینی ، ارگانها و ساختمانهای جدیدی از ماده زنده تمایز نیافته ، بوجود میآید. پژوهشهای جدید درباره وراثت بوسیله گرگور مندل که کشیشی اتریشی بود، در نیمه دوم قرن 19 آغاز شد. وی دو قانون مهم را کشف کرد که همه پیشرفتهای بعدی علم وراثت بر پایه آنها بنا نهاده شده است.
شامل 144 اسلاید powerpoint
• مقاله با عنوان: استفاده از روش تکاملی برنامه ریزی بیان ژن در برآورد میزان آبشستگی پایه های پل در بستر های غیر چسبنده براساس داده های آزمایشگاهی و میدانی
• نویسندگان: کیومرث روشنگر ، شبنم میرحیدریان
• محل انتشار: هشتمین کنگره ملی مهندسی عمران - دانشگاه صنعتی نوشیروانی بابل - 17 و 18 اردیبهشت 93
• محور: سازه های هیدرولیکی
• فرمت فایل: PDF و شامل 9 صفحه می باشد.
چکیــــده:
همه ساله پلهای زیادی بدلیل آبشستگی پایههای آن در اثر جریان آب در رودخانهها تخریب میشوند، بنابراین پیش بینی عمق آبشستگی پایهی پل برای طراحی ایمن و اقتصادی پل ضروری است. تاکنون، تحقیقات آزمایشگاهی و صحرایی در زمینه آبشستگی اطراف پایههای پل، منجر به ارائه روابط متعدد برای برآورد حداکثر عمق آبشستگی شده است. در این تحقیق، روش برنامه ریزی بیان ژن (GEP) برای تخمین میزان آبشستگی پایههای پل برای بستر با خاک غیر چسبنده مورد استفاده قرار گرفته است. نتایج حاصل از شبیه سازی نشان داد که برنامه ریزی بیان ژن (GEP) در تخمین عمق آبشستگی پایههای پل برای خاکهای غیر چسبنده، در مقایسه با معادلات غیر خطی موجود عملکرد موثر و کارایی بهتری دارد. همچنین از بین معادلات موجود معادله CSU برای خاکهای غیر چسبنده منجر به نتایج بهتری شده است. براساس آنالیز حساسیت سرعت جریان بیشترین تأثیر را بر میزان عمق آبشستگی برای داده های آزمایشگاهی در حالت با بعد دارد، اما برای دادههای میدانی عمق جریان موثرتر است.
مقدمه:
پلها به عنوان کلید راههای ارتباطی از جمله مهمترین سازههای رودخانهای هستند. هر ساله با وقوع سیلاب در هر رودخانه تعداد زیادی از این پلها، درست زمانی که بیشترین نیاز به آنها وجود دارد تخریب میگردند. یکی از مهمترین و مؤثرترین عوامل این تخریبها آبشستگی اطراف پایههای پل میباشد. به فرسایش بستر و کناره آبراهه در اثر عبور جریان آب، فرسایش بستر در پایین دست سازههای هیدرولیکی به علت شدت جریان زیاد و یا به فرسایش بستر در اثر بوجود آمدن جریانهای متلاطم موضعی، آبشستگی گویند. همچنین عمق ناشی از فرسایش بستر نسبت به بستر اولیه را عمق آبشستگی مینامند. تعیین دقیق عمق آبشستگی پایهها، برای طراحی ایمن و اقتصادی پایههای پل ضروری است. زیرا تخمین کم عمق آبشستگی ممکن است منجر به تخریب پل و تخمین زیاد منجر به هزینههای اضافی گردد.
طی سالهای اخیر مطالعات متنوعی در زمینه تخمین عمق آبشستگی پایههای پل انجام گرفته است. از جمله شن در مطالعات خود به این نتیجه رسید که نسبت عمق آبشستگی به عرض پایه با عدد فرود پایه ارتباط دارد. کوتیاری وهمکاران مطالعهای بر روی تغییرات زمانی عمق آبشستگی حول پایههای دایرهای در جریان آب زلال در شرایط جریان دائمی و غیر دائمی انجام داده و رابطهای برای تخمین حداکثر عمق آبشستگی موضعی ارائه کردند.
امروزه استفاده از سیستمهای کامپیوتری در محاسبات پیچیده، گسترش بسیاری یافته است. از جمله این سیستمهای کامپیوتری، الگوریتم تکاملی است. الگوریتمهای تکاملی، روشهایی بر مبنای جستجوی تصادفیاند که از مدل سازی بیولوژیکی طبیعی الگو برداری شدهاند. آنها بر روی پاسخهای ممکنی کار میکنند که از ویژگی برتری برخوردارند و بقای نسل بیشتری دارند، لذا تخمین نزدیکتری از پاسخ بهینه بدست میدهند. الگوریتم تکاملی تفاوت اساسی با دیگر روشهای بهینه سازی دارد چراکه تنها یک نقطه را جستجو نمیکند، بلکه جمعیتی از نقاط را بصورت موازی بررسی مینماید و نیاز به اطلاعات ضمنی و دیگر دانشهای مکمل ندارد، فقط تابع هدف و شایستگی مربوطه در جهتهای جستجو تاثیر گذارند. همچنین هیچگونه محدودیتی برای تعریف تابع هدف وجود ندارد و از قوانین در حال تغییر احتمالی بهره میبرند نه موارد مشخص و معین.
در این تحقیق با استفاده از دادههای آزمایشگاهی و میدانی قابلیت و کارایی روش تکاملی برنامه ریزی بیان ژن (GEP) در تخمین عمق آبشستگی پایههای پل در مقایسه با روابط تجربی موجود در خاکهای غیر چسبنده مورد ارزیابی قرار گرفته و همچنین اثر پارامترهای هیدرولیکی، مشخصات پایه و بستر مورد بررسی قرار خواهد گرفت. تاکنون تحقیقات محدودی در خصوص بکارگیری از روش GEP انجام یافته است. از جمله آیتک و کیشی، روش جدید GEP را برای فرموله نمودن رابطه رسوبات معلق و دبی روزانه بکار گرفتند، که نتیجه مقایسات توانایی این روش را در تخمین رسوبات معلق تایید کرد. همچنین آیتک و همکاران برای مدلسازی بارش - رواناب، دو روش GEP و شبکههای عصبی مصنوعی (ANN) را مقایسه کردند، که نتیجه برتری برنامه ریزی بیان ژن را اثبات کرد.
________________________________
** توجه: خواهشمندیم در صورت هرگونه مشکل در روند خرید و دریافت فایل از طریق بخش پشتیبانی در سایت مشکل خود را گزارش دهید. **
** توجه: در صورت مشکل در باز شدن فایل PDF مقالات نام فایل را به انگلیسی Rename کنید. **
** درخواست مقالات کنفرانسها و همایشها: با ارسال عنوان مقالات درخواستی خود به ایمیل civil.sellfile.ir@gmail.com پس از قرار گرفتن مقالات در سایت به راحتی اقدام به خرید و دریافت مقالات مورد نظر خود نمایید. **
یکی از زمینه های که امروزه بیوتکنولوژیست ها روی آن تحقیق می کنند ایجاد گونه های ترانسژنیک است. طبق تعریف ترانسژنیک موجودی است که، دارای DNA نو ترکیبی باشد. به طوری که در ژنوم آن موجود ژن نو ترکیب بیان می شود. بیان ژن خارجی یکی از جنبه های تولید ترانسژنیک و انتقال DNA به زاده های هدف بعدی می باشد. در این زمینه تکنیک میکرواینجکش در انتقال ژن به تخم مهره داران اولین بار به وسیله گوردون (Gordon) و همکاران در سال 1980 گزارش شد. در این تکنیک یک لوله مؤئین شیشه ای را برای وارد کردن DNA نو ترکیب به پیش هسته نریا با سیتوپلاسم تخم لقاح یافته موش به کار گرفتند. در همین سال میکروانجکش مستقیم DNA نو ترکیب در شرایط آزمایشگاهی جهت ایجاد حیوانات ترانسژنیک مورد استفاده قرار گرفته است. طوری که ژن را از این طریق وارد تخم های لقاح نیافته یا لقاح یافته موجوداتی نظیر جنین توتیای دریایی، موش، قورباغه، مگس سرکه، خرگوش و خوک کرده اند (Brem 1988) در سال 1985 زئو (Zhu) و همکاران ژنی شامل پرتومتالوتیونین موش و ژن هورمون رشد انسانی را به ناحیه مرکزی صفحه زایای تخم های لقاح یافته ماهی طلایی تزریق کردند و قسمتی از این ژن را در DNA ماهیان مشاهده کرند. در همین سال روکونس (Rokkones) تکنیک میکرواینجکشن دو مرحله ای بر روی تخم آزاد ماهیان را شرح داده است. در این تکنیک ابتدا به کمک یک وسیله نوک تیز فلزی در قطب حیوانی سوراخی ایجاد شده و از طریق این سوراخ محلول حاوی DNA نو ترکیب به کمک پی پت ریز تخم شدند به طوری که به کیسه زرده وارد نشوند. پس از 14 روز پلاسمیدهای کامل را مشخص کردند. چوروت (Chourrout) و همکاران در سال 1986 روش فوق را بر روی قزل آلای قهوه ای رنگ به کار برند با توجه به وجود DNA خارجی همراه با ملکولهای DNA میزبان پیشنهاد شده که این ژن به داخل ژنوم ماهی وارد شده است. محققان به ورش دستی یا از طریق هضم آنزیمی از جمله با تریپسن کوریون را برداشته و تزریق میکرواینجکشن انجام دادند. در همین سال اوزاتا (Ozata) ماهی کوچک مدوکا را به عنوان مدلی برای ترانسژنیک مطرح کرد. او پلاسمیدهای حاوی ژن کریستالین جوجه را به هسته تخم ها از طریق میکرواینجکشن وارد کرد. به علت کوریون سفت در تخم لقاح یافته تعدادی از ماهیان استفاده از میکرواینجکشن مشکل و مستلزم اتلاف وقت زیادی است. به همین منظور روشهایی جهت غلبه بر این مشکل به کار گرفته شده است. از جمله در سال 1988 بریم (Brem) و همکاران ژن هورمون رشد انسان را به کمک وکتور مناسب از طریق میکروپیل به صفحه زایای تخم های تیلاپیا تزریق کردند و رشد بچه ماهیان طی 90 روز بررسی شد. مشابه این تحقیق توسط فلت چر (Fletcher) و همکاران در همین سال بر روی ماهی آزاد اتلانتیک انجام شد. همچنین تکنیکهای دیگر شامل الکتروپورشن (Electroporation) شلیک ذرات ژن Shatagun بر روی تخمک و طراحی لیپوزوم جهت ورود به زرده تخم انجام شده است. میکر واینجکشن نیاز به مهارت زیادی دارد و از طرفی سرعت آن کم و هزینه و تجهیزات آن زیاد است و مستلزم زحمات و زمان زیادی برای ایجاد تعداد زیادی از ما هیان ترانسژنیک است علاوه بر این از دیگر مشکلات آن این است که در تخم های القاح یافته اغلب ماهیان هسته به وسیله میکرسکوپ قابل روئیت نیست بنابراین DNA را به سیتو پلاسم تزریق می کنند.
مقدمه
1-1- به کار گیری پروموتر از ژن ماهیان
2-1- بیان ژن هورمون رشد ماهی در باکتری
3-1- انتقال ژن به تخم ماهی از طریق میکروپیل با میکروپیپت
4-1- انتقال ژن از طریق اسپرم با انکوبه کردن آن در سیستم بافری
5-1- انقال ژن از طریق اسپرم با الکتروپورشن در سیستم بافری
6-1- انتقال ژن به تخم ماهی از طریق الکتروپورش
7-1- انتقال ژن به تخم ماهی از طریق میکروپیل با میکرواینجکشن
8-1- بررسی امکان وراثت ژن منتقل شده به نسل ها بعد
بخش دوم : دست کاریهای کروموزومی در ماهیان
1-2- دست کاریهای جنسی
1-1-2- دست کاریهای جنسی با تکنیک ژینوژنز
2-1-2- دست کاریهای مجموعه کروزومی به وسیله تکنیک اندروژنز
2-2- پلوئیدی
1-2-2- تریپلوئیدی
2-2-2- تتراپلوئیدی
بخش سوم: کلونینگ
مقدمه
1-3- ایجاد کلون به وسیله دوژینوژنز متوالی
2-3- کلون کردن به وسیله ترکیبی از اندروژنز و ژینوژنز
3-3- جابجایی هسته
4-3- جابجایی سلولهای سوماتیک جنینی به جنین دیگر
5-3- دورگه گیری
4- منابع
شامل 50 صفحه فایل word