پایان نامه شناسایی و طراحی آغازگرهای نشانگر ریزماهواره در ماهی راشگوی معمولی(Eleutheronema tetradactylum, Shaw,1804) خلیج فارس

اختصاصی از کوشا فایل پایان نامه شناسایی و طراحی آغازگرهای نشانگر ریزماهواره در ماهی راشگوی معمولی(Eleutheronema tetradactylum, Shaw,1804) خلیج فارس دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:98

پایان نامه دکتری رشته زیست شناسی دریا گرایش جانوران دریایی

فهرست مطالب:
صفحه         عنوان
        فصل اول: مقدمه و کلیات
        
1        1-1- مقدمه
5        1-1-1- اهداف و فرضیه های تحقیق    
6        1-2- کلیات
7        1-2-1- ویژگی های ماهی راشگوی معمولی
7        1-2-1-1- طبقه بندی
7        1-2-1-2- اسامی متداول
8        1-2-1-3- ریخت شناسی گونه
10        1-2-1-4- تغذیه ماهی راشگوی معمولی
10        1-2-1-5- تولیدمثل ماهی راشگوی معمولی
10        1-2-1-6- محل زندگی و گستردگی جغرافیایی ماهی راشگوی معمولی
11        1-2-1-7- وضعیت صید ماهی راشگوی معمولی
12        1-2-1-8- مشخصات عمومی خلیج فارس
13        1-3- تنوع ژنتیکی و اهمیت آن
15        1-3-1- نشانگر چیست؟
16        1-3-1-1- انواع نشانگر
16        1-3-1-2- نشانگرهای ژنتیکی
18        1-3-1-3- نشانگرهای ریخت شناسی
18        1-3-1-4- نشانگرهای فیزیولوژیکی
18        1-3-1-5- نشانگرهای سیتولوژیکی
18        1-3-1-6- نشانگرهای مولکولی
19        1-3-1-6-1- نشانگرهای پروتئینی
20        1-3-1-6-2- نشانگرهای DNA
21        1-3-1-7- ریزماهواره ها
22        1-3-1-7-1- انواع ریزماهواره ها
23        1-3-1-7-2- جداسازی ریزماهواره ها
24        1-3-1-7-3- تکامل ریزماهواره ها
25        1-3-1-7-4- تشخیص آلل های ریزماهواره ای
25        1-3-1-7- 5- چندشکلی ریزماهواره ها
26        1-3-1-7-6- مزایای ریزماهواره ها
26        1-3-1-7-7- مشکلات کار با ریزماهواره ها
29        1-3-1-8- استراتژی نمونه گیری
30        1-3-1-8-1- اندازه نمونه ی مورد نیاز در مطالعات ریزماهواره ای
32        1-3-1-9- کاربردهای ریزماهواره ها
32        1-3-1-9-1- تعیین هویت، آزمون انساب و آنالیز خویشاوندی
33        1-3-1-9-2- نقشه یابی ژنومی
33        1-3-1-9-3- تعیین میزان همخونی
34        1-3-1-9-4- مطالعات مربوط به حفاظت از گونه ها و ژنتیک جمعیت
35        1-3-1-10- تشخیص آلل های ریزماهواره ای
37        1-3-1-11- ناقل
37        1-3-1-11-1- پلاسمید
39        1-3-1-11-1-1- پلاسمید pTZ
39        1-3-1-12- الحاق قطعات به درون ناقل ها
40        1-3-1-13- فسفاتاز قلیایی
40        1-3-1-14- ایجاد DNA نوترکیب
40        1-3-1-15- دگرگونی
42        1-3-1-16- غربال کردن ژنتیکی
42        1-3-1-17- تعیین توالی DNA
        
        
        فصل دوم : مروری بر پیشینه تحقیق
        
45        2-1- مطاعات انجام شده در داخل کشور
45        2-2- مطالعات انجام شده در خارج کشور
        
        
        فصل سوم : مواد و روش های تحقیق
        
49        3-1- روش های مورد استفاده در این تحقیق
49        3-1-1- نمونه برداری
50        3-1-2- استخراج DNA از باله دمی ماهی با استفاده از CTAB
50        3-1-3- ارزیابی کیفیت و کمیت DNA استخراج شده
50        3-1-3-1- روش اسپکتروفتومتری
51        3-1-3-2- روش الکتروفورزی
51        3-1-3-2-1- بررسی الکتروفورزی کیفیت DNA استخراج شده
51        3-1-4- هضم DNA الگو
52        3-1-5- هضم پلاسمید pTZ57R/T
53        3-1-6- دی فسفریلاسیون DNA هدف با ناقل
53        3-1-7- احیایDNA  الگو هضم شده از روی ژل آگارز
54        3-1-8- تهیه محلول ذخیره سازی باکتری TG1
54        3-1-9- آماده سازی سلول های پذیرا
55        3-1-10- آماده سازی محیط کشت باکتری( LB مایع و جامد)
56        3-1-11- خالص سازی پلاسمید دی فسفریله شده
57        3-1-12- الحاق DNA الگو به ناقل
57        3-1-13- انتقال پلاسمید نوترکیب به سلول پذیرا
58        3-1-14- بررسی سریع پلاسمید های نوترکیب
59        3-1-15- تخلیص پلاسمید به روش لیز قلیایی
60        3-1-16- تعیین توالی نوکلئوتیدی
60        3-1-17- طراحی و مشخصات آغازگرها
60        3-1-18- واکنش زنجیره ای پلیمراز PCR
61        3-1-19- بررسی محصولات PCR بر روی ژل اگارز
61        3-1-20- ثبت تصاویر
        
        
        فصل چهارم: نتایج
        
63        4-1- نتایج بررسی کمیت و کیفیت DNA استخراج شده
63        4-1-1- روش الکتروفورزی
63        4-1-2- طیف سنجی DNA
64        4-2- نتایج حاصل از برش آنزیمی پلاسمید
64        4-3- نتایج حاصل از برش آنزیمی DNA ژنومی
65        4-4- نتایج حاصل از خالص سازی پلاسمید
66        4-5- احیای قطعات کوچک از روی ژل آگارز
67        4-6- نتایج حاصل از فسفریله کردن پلاسمید
67        4-7- نتایج حاصل از فسفریله کردن قطعات برش یافتهDNA   ژنومی
68        4-8- نتایج حاصل از الحاق پلاسمید به قطعات DNA ژنومی
69        4-9- نتایج حاصل از الحاق پلاسمید و قطعات DNA ژنومی به باکتری TG1
69        4-10- نتایج حاصل از جداسازی پلاسمید و قطعات DNA ژنومی از باکتری
70        4-11- نتایج حاصل از تعیین توالی پلاسمید و قطعات DNA ژنومی تکثیر یافته در باکتری
72        4-12- نتایج حاصل از طراحی آغازگر از توالی های بدست آمده
73        4-13- نتایج حاصل از PCR
78        4-14- آللهای پلی مورف (چند شکل)
79        4-15- تعداد آلل واقعی  ( Na)و موثر Ne ) )
79        4-16- آزمون آغازگرهای چندشکلی ماهی راشگوی معمولی با نمونه های ماهی راشگوی شش خط Polynemus sextarius  
        
        
        فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری
        
84        5-1- شناسایی و جداسازی آغازگرها ی ریزماهواره
88        5-2- آلل های چندشکل و اختصاصی
89        5-3- آزمون آغازگرها در جمعیت ماهی راشگوی شش خط
89        5-4- نتیجه گیری نهایی
90        5-5- پیشنهادات
        
91        منابع و مآخذ
98        پیوست ها
        
       

فهرست اشکال
صفحه        عنوان
9        شکل 1-1- ماهی راشگوی معمولی
98        شکل 1-2- ماهی راشگوی معمولی
11        شکل 1-3- پراکنش ماهی راشگوی معمولی در جهان
12        شکل 1-4- وضعیت صید ده ساله ماهی راشگوی معمولی در ایران
13        شکل 1-5- هرم تنوع زیستی در سه سطح ژن، گونه و اکوسیستم
17        شکل 1-6- مقایسه نشانگرهای مختلف از نظر هزینه، امکانات مورد نیاز، مقدار اطلاعات  ...
35        شکل 1-7- شمایی از تنوع ریزماهواره ایی که بوسیله آغازگرها یا بوسیله یک کاوشگر  ...
39        شکل 1-8- کروموزوم و پلاسمیدها در باکتری
49        شکل 3-1- وضعیت صیدگاه های ماهی راشگوی معمولی در این تحقیق
63        شکل4-1- نمونه‌ای ازDNA استخراج شده به روش CTAB روی ژل آگاروز7/0 درصد   
64        شکل4-2- پلاسمید هضم شده با آنزیم BamHI روی ژل آگاروز7/0 درصد     
65        شکل4-3- DNA ژنومی هضم شده با آنزیم BamHI روی ژل آگاروز7/0 درصد     
66        شکل4-4- پلاسمید خالص سازی شده با کیت روی ژل آگاروز7/0 درصد     
67        شکل4-5- قطعاتDNA ژنومی برش یافته با آنزیم از روی ژل آگاروز7/0 درصد     
68        شکل4-6- قطعات برش یافتهDNA   ژنومی فسفریله شده روی ژل آگاروز7/0 درصد     
68        شکل4-7- الحاق پلاسمید با قطعات برش یافتهDNA   ژنومی روی ژل آگاروز7/0 درصد    
69        شکل4-8- الحاق DNA   نوترکیب به باکتری TG1 روی ژل آگاروز7/0 درصد     
70        شکل4-9- جداسازی DNA  نوترکیب تکثیر شده از باکتری TG1 روی ژل آگاروز     
71        شکل4-10- تعیین توالی نمونه Eletet 1-1  و توالی های ریزماهواره های شناسایی شده
71        شکل4-11- تعیین توالی نمونه Eletet 2  و توالی های ریزماهواره های شناسایی شده
71        شکل4-12- تعیین توالی نمونه Eletet 10   و توالی های ریزماهواره های شناسایی شده
72        شکل4-13- تعیین توالی نمونه Eletet 16   و توالی های ریزماهواره های شناسایی شده
72        شکل4-14- تعیین توالی نمونه Eletet 17   و توالی های ریزماهواره های شناسایی شده
74        شکل4-15- الگوی محصول PCR و باندهای منومورف DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet1-1   و Eletet1-2
75        شکل 4-16- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet 2  متعلق به 13 نمونه در مناطق نمونه برداری استان خوزستان
75        شکل 4-17- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet 2  متعلق به 15 نمونه در مناطق نمونه برداری استان  بوشهر

76
        
شکل4-18- الگوی محصول PCR و باندهای منومورف DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet10   
76        شکل 4-19- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet16.O متعلق به 13 نمونه در مناطق نمونه برداری استان خوزستان
77        شکل 4-20- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet16.O متعلق به 15 نمونه در مناطق نمونه برداری استان بوشهر
77        شکل 4-21- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet17 متعلق به 15 نمونه در مناطق نمونه برداری استان های بوشهر
78        شکل 4-22- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی معمولی با استفاده از آغازگر Eletet17 متعلق به 13نمونه در مناطق نمونه برداری استان خوزستان
80        شکل 4-23- الگوی محصول PCR و باندهای DNA ماهی راشگوی شش خط با استفاده از آغازگر Eletet2,16.0,17 متعلق به 5 نمونه در مناطق نمونه برداری استان بوشهر
        


فهرست جداول
صفحه        عنوان    
36        جدول 1-1- مقایسه خصوصیات چند نشانگر DNA
38        جدول 1-2- اندازه تقریبی بعضی از پلاسمیدها و منشاء آنها
49        جدول 3-1- تعداد و پراکنش نمونه های جمع آوری شده ماهی راشگوی معمولی
52        جدول 3-2- ترکیب مواد در محیط هضم آنزیمی DNA الگو
52        جدول 3-3- ترکیب مواد در محیط هضم آنزیمی پلاسمید
53        جدول 3-4- ترکیب مواد در محیط فسفاتاز قلیایی
57        جدول 3-5- ترکیب و حجم مواد در واکنش الحاق
61        جدول 3-6-  ترکیب و میزان مواد در واکنش PCR
73        جدول 4-1- توالی و مشخصات جفت آغازگرهای مورد استفاده در هر جایگاه
78        جدول 4-2- خصوصیات و نتایج بدست آمده از جایگاه های چندشکلی(پلی مورف)
79        جدول4 -3- تعداد آلل واقعی وموثر سه جایگاه  بررسی شده در ماهی راشگوی معمولی
88        جدول 5-1- متغیرهای جمعیت در مطالعات صورت گرفته برای ماهی راشگوی معمولی
      
             
93        جدول 4- 10- ماتریس فواصل ژنتیکی و شباهت ژنتیکی (Nei,1972)
        


فصل اول

 مقدمه و کلیات

1-1- مقدمه
عوامل متوازن ساختن معادله تولید و مصرف و یا به عبارت بهتر، تامین غذا برای مردم بسیارند که کشف ذخائر و منابع جدید یکی از آنها است. اما مدیریت و حفاظت صحیح این منابع یکی از متغیرها  و گزینه‌های تقریبا فراموش شده‌ای است که مطمئنا در آینده‌ای نه چندان دور، بشر را دچار مشکلات جدی خواهد نمود. امروزه در شرایطی که بشر به دلیل رشد روزافزون جمعیت (Apostolidis et al.,1996) نیاز به خوراک، پوشاک، دارو و مکان زندگی دارد، متأسفانه بیش از هر زمان دیگر شاهد از دست رفتن غم انگیز و فاجعه‌آمیز منابع جبران‌ناپذیر و بی‌بدیل حیات است.
نابودی گونه‌ها و از دست رفتن توانایی اکوسیستم‌ها برای رفع نیازهای روزافزون بشر، نابودی منابع ضروری و مورد نیاز برای رفع احتیاجات امروز و آینده ما است. کاهش تنوع زیستی به معنای کاهش توانایی ما برای به دست آوردن غذای کافی، دارو و پوشاک مورد نیاز، محیط زیست سالم و انواع مایحتاج زندگی است.
تنوع زیستی به معنای گوناگونی موجودات زنده، از انواع گیاهان و جانوران کوچک و بزرگ تا قارچ‌ها، جلبک‌ها و انواع موجودات ذره‌بینی است. موجودات زنده گوناگون که در سراسر دنیا پراکنده‌اند از نظر خصوصیات ظاهری، رفتاری، زیست محیطی و از نظر ژن ‌هایشان بسیار متفاوت می‌باشند و این تنوع، تنوع زیستی منظومه حیات کره زمین را تشکیل می‌دهد (FAO, 1998). تنوع زیستی بخش حساسی از سرمایه طبیعی است که بسیاری از داشته‌های ما از این سرمایه تامین می‌شود. تنوع زیستی علاوه بر آن که توسعه کشاورزی را ممکن می‌سازد، امکان سازگاری با شرایط جدید را برای گونه‌هایی که فاقد چنین امکاناتی هستند، فراهم می آورد. در حقیقت تنوع زیستی نوعی بیمه طبیعت در مقابل حوادث بد و ناگوار است. در این رهگذر خوش بینانه ترین تخمین ها، تعداد گونه‌های زیستی را کمتر از  6/13  میلیون گونه برآورد کرده‌اند و این همه آن چیزی است که از منابع زیستی در دسترس داریم (FAO, 1998). شاید در نگاه اول این تعداد گونه‌ها زیاد به نظر رسد اما وقتی به یاد آوریم که سالانه  نزدیک به ۳۰ هزارگونه گیاهى و جانورى را همگام با تخریب اکوسیستم ها و شکار و برداشت بیش از حد برخى از گونه‌ها، برای همیشه از دست مى‌دهیم. بیش از ۵۴۰۰ گونه از جانوران و ۵۷۰۰ گونه از گیاهان در شرایط بحرانی و در معرض خطر انقراض قرار دارند که اگر اوضاع به همین منوال باشد، تا پایان قرن بیست و یکم میلادی نیمی از گونه‌های زیستی موجود در جهان یعنی در واقع نیمی از تنوع زیستی جهان را از دست خواهیم داد، می‌بینیم که این تعداد گونه‌های موجود در جهان خیلی زیاد نیست و با ادامه روند کنونی نابودی تنوع زیستی، به زودی این سرمایه تجدید‌ناپذیر را از دست می‌دهیم (Bagley et al., 2004 FAO, 1999;).
انقراض گونه‌ها از زمان پیدایش حیات وجود داشته است. شاید تاکنون 30 میلیارد گونه بوجود آمده باشند، اما امروزه تنها 01/0 درصد آنها بر روی کره زمین زندگی می کنند. گرچه انقراض گونه‌ها یک چرخه طبیعی است، اما از زمان آغاز کشاورزی در ده هزار سال قبل، به همان شتابی که انسان به توسعه نامتوازن در سراسر کره زمین مشغول بوده، انقراض گونه‌ها نیز سرعت بیشتری پیدا  کرده است. در واقع، حذف بسیاری از گونه‌های جانوری و گیاهی روی زمین به دست انسان و برای دستیابی به منابع اقتصادی کوتاه مدت، نه تنها کوته نظری و اشتباه است، بلکه تهدید امنیت جهانی نیز به حساب می‌آید (Ward et al., 1994).
بنابراین با تعمیق فکر و اندیشه، امروزه جایگزین کردن نگرش "غلبه بر طبیعت" با "زندگی در طبیعت" و حفاظت از تنوع زیستی یکی از اساسی‌ترین مسائل غالب کشورهای جهان محسوب می‌گردد و این امر نیز بدون بررسی و شناخت تنوع زیستی یک منطقه یا کشور و به بیان دیگر شناسایی موجودات مختلف میسر نیست (FAO, 1998;  FAO, 1999).
خوشبختانه تنوع این ذخائر که یک موهبت و عنایت الهی است در کشورعزیزمان، کاملاً هویدا است و با بررسی های علمی ‌و هوشمندانه می‌توان به راه کار عملی برای حفاظت از این ذخایر دست یافت. وضعیت بحرانی زیستگاه‌ها و گونه‌ها یک حقیقت است و شانه خالی کردن از زیر بار مسئولیت، تنها منجر به تسریع این فرآیند زیان بار می‌گردد. بر کسی پوشیده نیست که اگر تمهیداتی در این زمینه در نظر گرفته نشوند روز به روز مشکلی همچون خالی شدن ذخایر ژنتیکی جدی تر می‌شود. لذا ضرورت دارد همه دست اندرکاران امر و همه آنهایی که احساس وظیفه ملی در مقابل ملت و کشور خود می کنند، آستین بالا زده و در فکر طرح نو برآیند و چاره‌ای بیاندیشند. در این راستا سند بیست ساله کشور، حفاظت محیط زیست و احیای منابع طبیعی را بعنوان یکی از اصول بند 19 و تحت عنوان آمایش سرزمین مورد تاکید قرار داده است (فیاضی، 1385).
یکی از عوامل عمده‌ای که باعث برخورد خشن انسان با طبیعت و از بین بردن تنوع زیستی شده است، نیاز شدید به مواد غذایی است. عدم تناسب بین رشد جمعیت و مقدار مواد غذایی در جهان باعث فشار بیشتر انسان به طبیعت و تنوع زیستی آن شده است (FAO, 1998; FAO, 1999). کشور ما، هم اکنون در ردیف کشورهای وارد کننده مواد پروتئینی قرار دارد. با این حال مصرف سرانه مواد پروتئینی مردم از مقدار استاندارد جهانی کمتر می باشد. این مسئله در مورد استفاده از پروتئین نوع حیوانی چشمگیرتر است. با توجه به معضلاتی که در سالهای اخیر گریبان گیر صنعت دام و طیور (نظیر جنون گاوی و انفلوآنزای طیور) شده است، روی آوردن به فرآورده‌های ماهی (به غیر از مزیت اسید چرب خوب آن‌یعنی ω3 ) امری اجتناب ناپذیر است و چه بسا در سال های آینده، داشتن منابع و ذخایر ژنتیکی خوب و مدیریت شده از ماهیان یکی از امتیازات کشورها خواهد بود       (رجایی و رجایی، 1383).
 اهمیت شناخت همه جانبه ی ماهیان جهت  بهره برداری بهینه از این ذخایر بر هیچ شخص آگاه از مسائل شیلات پوشیده نیست. تفاوت بین جمعیت ها می تواند از طریق ریخت شناسی و به دنبال آن نیز در سطح مولکولی ارزیابی گردد. خصوصیات ریخت شناسی (شمارشی و اندازه ای)     می تواند بعنوان اولین گام برای بررسی ساختار ذخایر گونه ها یا جمعیت ها در مقیاس بزرگ استفاده شود. با این وجود یک محدودیت عمده در کاربرد خصوصیات ریخت شناسی در سطوح داخلی وجود دارد که در آنها اختلافات فنوتیپی تحت کنترل مستقیم ژنتیکی قرار ندارد بلکه تعییرات محیطی نیز دخالت دارند (Bhassu et al., 2008).
امروزه با پیشرفت های  فن آوری بطور فزآینده ای از ژنتیک در تعیین تفاوت های جمعیت گونه های ماهی استفاده می شود. با فن آوری های مولکولی می توان تفاوت بین نژاد ها، ژنوتیپ ها یا افراد را در تحقیقات ژنتیک جمعیت با دقت مورد بررسی قرار داد. توصیف ویژگی های مختلف در سطوح  جمعیت می تواند به درک تنوع و ساختار ژنتیکی  بین و مابین جمعیت و نیز  مطالعه و حفاظت از جمعیت های کوچک بکار رود (Diniz et al., 2007). یکی از مسائل اساسی و بسیار مهم،  خصوصیات ژنتیکی ماهیان می باشد که با بررسی دقیق آن می توان اطلاعاتی جامع برای حفاظت از ماهیان و ارزیابی ذخایر یک جمعیت کسب کرد.
منابع ژنتیکی در حقیقت ماده خام و دست مایه ی اصلی پژوهشگران برای تولید       فرآورده های زیستی می باشد که بدون آن فن آوری زیستی دستاوردی نخواهد داشت. بنابراین به موازات گسترش فنون زیست فن آوری ، حفاظت ذخایر ژنتیکی را باید به عنوان سرمایه و ثروتی که روز به روز ارزش بیشتری پیدا  می کند، در راس اولویت های تحقیقات قرار داده و با یک برنامه ملی و همه جانبه امکان حفاظت و بهره برداری هر چه بهتر از ژن های موجود در تنوع زیستی کشور را در برنامه های فن آوری زیستی موجود فراهم نمود. شناسایی، حفاظت و استفاده پایدار از تنوع ژنتیکی فوق العاده ای که در منابع ژنتیکی آبزیان ایران مشاهده می شود برای موفقیت هر برنامه به نژادی و یا زیست فن آوری امری ضروری است (رجایی و رجایی، 1383).
کشورمان علاوه بر440 هزار منبع آبی داخلی با 1800 کیلومتر مرز آبی در خلیج فارس و دریای عمان و حدود 990 کیلومتر از سواحل جنوبی دریای خزر تنوع عظیمی از موجودات آبزی را در خود جای داده است. بنابراین دارای منابع غنی از آبزیان و توانایی بالا در پرورش و صید ماهی می‌باشد (Coad, 1998).  
بنابراین با توجه به اهمیت تنوع ژنتیکی ونقش آن در بررسی تاریخچه ی جمعیت‌ها و گونه‌ها، و ضرورت شناخت و حفاظت تنوع در حداقل کردن احتمال از بین رفتن گونه‌های مطلوب و پایدار کردن گونه‌ها (تنوع ژنتیکی برای سازش تکاملی گونه‌ها با تغییرات محیطی لازم است)، همچنین با توجه به اهمیت بالای ماهیان ممتاز بویژه راشگوی معمولی در اقتصاد شیلاتی کشور بویژه استان های جنوبی، سعی شد با بررسی بنیان ژنتیکی این ماهی، راه را برای مدیریت حفاظت این گونه‌ هموار نمود و راهکار‌هایی برای حداقل نمودن زوال تنوع ژنتیکی پیدا کرد.
در خصوص اهمیت شیلاتی راشگوی معمولی بایستی به نکات زیر اشاره نمود که این ماهی از دیر باز مورد توجه ویژه ساحل نشینان و در زمره ماهیان ممتاز منطقه خلیج فارس و دریای عمان قرار دارد. این گونه بعد از حلوا سفید  Pampus argenteus  بالاترین قیمت در میان آبزیان حوزه خلیج فارس را به خود اختصاص داده است. هرچند ذخایر این آبزی نسبت به ذخایر سایر ماهیان بسیار کمتر می باشد، اما از لحاظ ارزش اقتصادی مهم تر است. اهمیت این ماهی در اقتصاد شیلاتی کشور به حدی است که با وجود اینکه درصد کمی از فرآورده های شیلاتی را تشکیل می دهد، اما میزان درآمد آن قابل توجه می باشد (رجایی و رجایی، 1383).

1-1-1- اهداف و فرضیه های تحقیق
با توجه به اهمیت خصوصیات  ژنتیکی و نقش آن در بررسی تاریخچه ی جمعیت ها و بررسی موارد تکاملی گونه ها، ضرورت شناخت و حفاظت ژنتیکی در به حداقل رساندن احتمال از بین رفتن گونه ها و از طرفی پایدار کردن گونه ها (تنوع ژنتیکی برای سازش تکاملی با تغییرات محیطی لازم است) محرز می باشد (بابایی و همکاران،1380). گسترش برنامه های مدیریتی و انجام       فعالیت های بازسازی ذخایر ماهی راشگوی معمولی هنگامی می تواند مفید باشد که تنوع ژنتیکی ساختار جمعیتی آن درک شود زیرا این اطلاعات در انتخاب جمعیت های دهنده ژن در تکثیر مصنوعی و در امر بازسازی ذخایر ضروری به نظر می رسد.
 در زمان شروع این مطالعه بعلت نبود هیچگونه اطلاعاتی در خصوص توالی های     ریزماهواره ای (بانک ژنی  و سایت های مربوطه از جمله  NCBI) ماهی راشگوی معمولی و حتی خانواده این ماهی، تلاش گردید  با تعیین توالی‌های نوکلئوتیدی و شناسایی و جداسازی آغازگرهایی برای تکثیر توالی های ریزماهواره ای  از ژنوم این ماهی، تکنیک مولکولی مفیدی مبتنی بر ریزماهواره، در جهت شناسایی جمعیت راشگوی معمولی در سواحل خلیج فارس با اهداف کلی ذیل ارائه شود:

پایان نامه جداسازی و شناسایی اکتینومیست‌های تولید کننده‌ ترکیبات ضدمیکروبی از رسوبات بستر دریای مازندران

اختصاصی از کوشا فایل پایان نامه جداسازی و شناسایی اکتینومیست‌های تولید کننده‌ ترکیبات ضدمیکروبی از رسوبات بستر دریای مازندران دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:105

پایان نامه دوره‌ کارشناسی ارشد در رشته میکرو¬بیولوژی

فهرست مطالب:
عنوان                                                                                                                                                         صفحه

    1- مقدمه    2
1-1- تاریخچه آنتی بیوتیک    2
1-1-1- مکانیسم عمل آنتی بیوتیک‌ها    5
1-1-2- ژنتیک تولید آنتی بیوتیک    7
1-1-3- عوامل موثر بر تولید آنتی بیوتیک    7
1-1-4- ویژگی‌های یک آنتی‌بیوتیک    8
1-2-نیاز به کشف ترکیبات فعال زیستی    8
1-2-1- کشف ترکیبات فعال زیستی    9
1-2-2- محدودیت های کشف ترکیبات فعال از طبیعت    9
1-3- روش‌های نوین کشف دارو    10
1-3-1- منابع برای داروهای جدید    10
1-3-2-  روند کنونی کشف دارو    10
1-3-3- مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌ها و نیاز به داروهای جدید    11
1-3-4-  استفاده توام از آنتی‌بیوتیک‌ها    14
1-4-  علت انتخاب میکروارگانیسم‌ها برای کشف ترکیبات فعال زیستی    14
1-5- اکتینومیست‌ها    14
1-5-1-  ویژگی‌ اکتینومیست‌ها    15
1-5-2-  مورفولوژی اکتینومیست‌ها    16
1-5-3-  فیزیولوژی اکتینومیست‌ها    17
1-5-4- اکولوژی اکتینومیست‌ها    18
1-5- 5- طبقه بندی اکتینومیست‌ها    19
1-5-6- متابولیت‌های ثانویه    20
1-5- 7- اکتینومیست‌های تولید کننده ترکیبات فعال    21
1-5-8- تنوع شیمیایی ترکیبات تولید شده توسط اکتینومیست    23
1-5-8-  اهمیت استرپتومیسس‌ها    24
1-5-9-  اکتینومیست‌های دریایی    25
1-5-10-متابولیت‌های ضد قارچی و اهمیت اکتینومیست‌های دریایی    27
1-5- 11- اکتینومیست‌های دریایی، منبعی برای کشف داروی جدید    28
1-6- اهداف پژوهش    29
2- مواد و روش‌ها:    32
2-1- دستگاه‌ها و تجهیزات    32
2-2- محلول‎ها و مواد مورد نیاز    33
2-3- جمع‌آوری نمونه    36
2-4- غنی‌سازی و کشت اکتینومیست‌ها    37
2-5- جداسازی و تهیه کشت خالص اکتینومیست‌ها    38
2-6- حفظ و نگهداری ذخایر کشت باکتریایی    38
2-6-1- نگهداری کوتاه‌مدت    38
2-6-2- روش نگهداری بلند مدت    38
2-7- شناسایی باکتری‌ها    39
2-7-1- بررسی مورفولوژی    39
2-7-2- بررسی مورفولوژی باکتریایی و رنگ‌آمیزی گرم    39
2-7-3-تولید پیگمان محلول    40
2-8-غربالگری اولیه اکتینومیست های دارای فعالیت ضد باکتریایی    40
2-9- استخراج عصاره خام جدایه‌های فعال اکتینومیست    41
2-10-غربالگری ثانویه برای یافتن متابولیت‌های ضد میکروبی    41
2-10-1-بررسی فعالیت ضد باکتریایی سویه‌های فعال    41
2-10-2-بررسی فعالیت ضد قارچی سویه‌های فعال    42
2-10-3-فعالیت سینرژیسمی عصاره خام اکتینومیست‌ها با آنتی بیوتیک    43
2-10-4- فعالیت عصاره خام اکتینومیست‌ها علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین    43
2-12-بررسی فعالیت اگزوآنزیمی سویه‌های فعال    44
2-13- استخراج  نوکلئیک اسید به روش بیدبیتر    44
2-14- الکتروفورز با ژل آگارز 8/0 درصد    45
2-15- تکثیر ژن rDNA 16S    46
2-15-1- برنامه PCR برای ژن‌های 16S rDNA:    46
2-16- تخلیص محصول PCR    47
2-17- بررسی مولکولی ژن 16S rDNA    47
2-17-1- تعیین توالی ژن 16S rDNA:    47
2-17-2- انجام BLAST    48
2-17-3- رسم درخت فیلوژنی ژن 16S rDNA    48
3- نتایج    50
3-1- جداسازی اکتینومیست‌ها    50
3-2- غربالگری اولیه جهت شناخت جدایه‌های فعال    52
3-3- غربالگری ثانویه جدایه‌های فعال علیه باکتری‌های بیماریزا    55
3-4- بررسی فعالیت ضد قارچی جدایه‌های فعال    56
3-5- فعالیت سینرژیسمی عصاره خام اکتینومیست‌ها با آنتی بیوتیک    58
3-6- فعالیت عصاره خام اکتینومیست‌ها علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین (MRSA)    59
3-7- فعالیت آنزیمی جدایه‌ها    61
3-8- مورفولوژی اسپور کلنی و رنگ آمیزی جدایه‌ها    61
3-9-تولید پیگمان محلول    65
3-10- استخراج نوکلئیک اسید و آنالیز آن با الکتروفورز    66
3-11- تکثیر ژن 16s rDNA جدایه‌های فعال    67
3-11-1- شناسایی مولکولی جدایه‌ها و رسم درخت فیلوژنی ژن 16S rDNA    68
4- بحث و پیشنهادات    73
4-1- جداسازی اکتینومیست‌های دریایی    75
4-2- غربالگری سویه‌های اکتینومیست فعال    75
4-3- استخراج متابولیت‌ها    76
4-4-غربالگری ثانویه عصاره خام جدایه‌های فعال    76
4-5- فعالیت عصاره خام اکتینومیست‌ها علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین    77
4-6- مورفولوژی کلنی‌ها    78
4-7- بررسی توالی‌ 16S rDNA    79
4-8- جمع بندی    79
4-9-پیشنهادات    81
منابع


فهرست اشکال

شکل 1-1. متابولیت‌های اولیه و ثانویه و زمان تشکیل این ترکیبات در نمودار رشد باکتری‌ها.    20
شکل 2- 1- خط کش ژنی یک kb    35
شکل3- 1. درصد فراوانی جدایه‌های اکتینومیست جداشده از نمونه‌ رسوبات بستر دریا بر حسب عمق آب    51
شکل 3-2 سویه MN2 جداشده از رسوبات بستر دریای مازندران    51
شکل3-3. درصد فراوانی جدایه‌های فعال  علیه باکتری‌های بیماریزا در غربالگری اولیه    54
شکل3- 4. غربالگری اولیه با روش cross-streak.    54
شکل 3-6. فعالیت ضد قارچی عصاره خام استخراج شده از جدایه‌ها.    58
شکل 3-7. اثر سینرژیسمی عصاره خام سویه MN2 با آنتی بیوتیک تتراسایکلین.    59
شکل 3-8. هاله عدم رشد دیسک‌های آغشته به عصاره خام استخراج شده از جدایه‌های فعال علیه MRSA.    60
شکل 3-9 . فعالیت آنزیمی جدایه MN2 .    61
شکل 3-10 . وضعیت اسپور: تولید اسپور منفرد توسط جدایه MN2 (A)و اسپور زنجیره‌ای توسط جدایه (B).MN3    63
شکل 3-11 . شکل انشعابات اسپور: تولید اسپور ساده توسط جدایه MN2 (B)و اسپور منشعب توسط MN38(A).    63
شکل 3-12 . ظاهر کلنی‌ اکتینومیست‌های تولیدکننده متابولیت‌های فعال MN38    64
شکل3-13.  اکتینومیست رشته‌ای:  شکل سلول‌های سویه  MN2 رنگ‌آمیزی شده    64
شکل 3-14. تولید پیگمان محلول رنگی توسط جدایه‌های فعال.    65
شکل 3-15. الکتروفورز نوکلئیک اسید استخراج شده از 7 سویه فعال اکتینومیست‌های جداشده  بر روی ژل آگاروز    67
شکل 3-16. الکتروفورز تکثیر ژن  16SrDNA به کمک ژل آگاروز .    68
شکل 3-17. . دندوگرام توالی ژن 16S rDNA جدایه‌های فعال.    71


 فهرست جداول

جدول 1-1. دسته‌بندی دارو‌های ضد میکروبی و نحوه‌ی اثر آن‌ها    7
جدول 1-2- . ترکیبات جدید کشف شده از اکتینومیست‌های دریایی    29
جدول 2-1. مشخصات جغرافیایی و عمق محل نمونه‌برداری در دریای مازندران.    36
جدول 2-2- ترکیب محیط‌های کشت.    37
جدول 3-1- توالی پرایمرهای PA و PH  برای واکنش زنجیره‌ای پلیمراز    46
جدول3- 2. غربالگری اولیه اکتینومیست‌های جداشده از رسوبات بستر دریا با روش cross-streak.    53
جدول 3-3. غربالگری ثانویه با استفاده از عصاره خام استخراج شده از جدایه‌های فعال    56
جدول 3-4. فعالیت ضد قارچی عصاره خام جدایه‌های اکتینومیست فعال    57
جدول 3-5. فعالیت ضدباکتریایی عصاره خام استخراج شده از جدایه‌ها علیه استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین (MRSA) و استافیلوکوکوس اورئوس جداشده از بیماران به روش دیسک دیفیوژن.    60
جدول 3-6. مورفولوژی اسپور و رنگ کلنی‌ جدایه‌ها    62
جدول 3-7. نتایج بررسی BLAST توالی جدایه‌ها و شباهت آن‌ها در بانک اطلاعاتی NCBI و EzTaxon    69

چکیده
اکتینومیست‌ها همواره به عنوان یک منبع اصلی تولید کننده آنتی‌بیوتیک‌های جدید و متابولیت‌های ثانویه متنوع، در داروسازی مورد توجه بوده‌ است. هدف از این تحقیق جداسازی اکتینومیست‌های تولیدکننده متابولیت‌های فعال از رسوبات بستر دریای مازندران و بررسی پتانسیل تولید متابولیت‌های ضدباکتریایی، ضد قارچی و آنزیمی توسط این ارگانیسم‌ها می‌باشد. رسوبات دریای مازندران از اعماق 5 و 10 متر جمع‌آوری شد. نمونه‌ها رقیق شده و برای جداسازی اکتینومیست‌ها در محیط کشت انتخابی استارچ کازئین آگار (SCA) کشت داده شد. جدایه‌ها توسط روش‌های مورفولوژی و میکروسکوپی کلنی‌ها، شناسایی و جداسازی شدند. غربالگری اولیه جهت یافتن جدایه‌های فعال با روش Cross streak انجام شد. متابولیت‌های تولید شده توسط جدایه‌های فعال، استخراج شد و بررسی فعالیت این عصاره خام علیه باکتری‌ها و قارچ‌های بیماریزا و باکتری‌های مقاوم به آنتی بیوتیک با استفاده از روش انتشار در دیسک بررسی شد. از رسوبات دریا، تعداد 80 جدایه اکتینومیست جداسازی و شناسایی شد. در غربالگری اولیه 7 جدایه دارای بهترین فعالیت ضدباکتریایی به عنوان اکتینومیست‌ فعال بررسی شدند. نتایج مرحله دوم غربالگری نشان داد که جدایه‌های فعال جداشده، فعالیت ضد قارچی خوب علیه گونه‌های کاندیدا و آسپرژیلوس داشتند. نتایج نشان داد که جدایه‌های MN39، MN2 و MN3 فعالیت ضد قارچی بیشتری نسبت به بقیه جدایه‌ها نشان دادند. همچنین سویه‌های MN2(16±1.4) و (18±1.4) MN39 دارای فعالیت بهتری نسبت به آنتی‌بیوتیک وانکومایسین (14±1.4) علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین (MRSA) نشان دادند. بررسی توالی ژن 16S rDNA سویه‌های فعال و رسم درخت فیلوژنی آن‌ها نشان داد که 7 جدایه فعال متعلق به جنسsp. Streptomyces می‌باشند. در این تحقیق به منظور بررسی فعالیت ضد میکروبی میکروارگانیسم‌های بومی ایران، برای اولین‌ بار از رسوبات بستر دریای مازندران، اکتینومیست‌ها جداسازی و مطالعه شدند. نتایج نشان داد که رسوبات بستر دریای مازندران می‌تواند به ‌عنوان منبع غنی از اکتینومیست‌های فعال که توانایی تولید متابولیت‌های ضد میکروبی جدید را دارند، مورد مطالعه دقیق‌تری قرار گیرد. بنابراین با  خالص‌سازی و مطالعه دقیق‌تر متابولیت‌های فعال اکتینومیست‌های رسوبات بستر دریای مازندران، بتوان آنتی‌بیوتیک‌های جدید و مناسب برای درمان بیماری‌های عفونی ناشی از میکروارگانیسم‌های مقاوم، معرفی کرد.
کلمات کلیدی: اکتینومیست‌های دریایی، فعالیت ضد میکروبی، دریای مازندران

پرسشنامه شناسایی ارتباطات

اختصاصی از کوشا فایل پرسشنامه شناسایی ارتباطات دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

پرسشنامه شناسایی ارتباطات،دارای 3 سوال می باشد و نحوه امتیاز بندی و تفسیر نتایج،روایی و پایایی نیزآمده است.

دانلود پاورپوینت کاملی با عنوان شناسایی و مدیریت ریسک های بانکی

اختصاصی از کوشا فایل دانلود پاورپوینت کاملی با عنوان شناسایی و مدیریت ریسک های بانکی دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت : POWERPOINT(قابل ویرایش)

تعداد اسلاید : 50 اسلاید

این محصول شامل  پاورپوینت کاملی با عنوان شناسایی و مدیریت ریسک های بانکی می باشد که قابل استفاده دانشجویان محترم رشته های مدیریت و بانکداری و حسابداری و ... می باشد و با تعداد 50 اسلاید قابل ویرایش با تخفیف ویژه ای در اختیار شما قرار می گیرد.

توجه :

این محصول شامل نمودارها و جداول و تصاویر مرتبط و مفهومی در خصوص شناسایی و مدیریت ریسک های بانکی می باشد و در هیچ فروشگاهی با این قیمت در اختیار شما قرار نمی گیرد.

دانلود پایان نامه شناسایی ورتبه بندی عوامل موثر بر تصمیم گیری سهامداران در خرید سهام عادی در بورس اوراق بهادار تهران

اختصاصی از کوشا فایل دانلود پایان نامه شناسایی ورتبه بندی عوامل موثر بر تصمیم گیری سهامداران در خرید سهام عادی در بورس اوراق بهادار تهران دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

قابل ویرایش

فهرست مطالب

عنوان                                                                                                    صفحه

چکیده............................................. 1

فصل اوّل: کلیات تحقیق

1-1- مقدمه........................................ 2

1-2- اهمیت موضوع (تعریف مساله هدف از اجراء و کاربرد نتایج تحقیق) 3

1-3- اهداف پژوهش.................................. 4

1-4- فرضیات (یا سئوالات پژوهشی).................... 4

1-4-1- سؤالات اصلی پژوهش........................... 4

1-4-2- فرضیات پژوهش............................... 5

1-5- قلمرو تحقیق.................................. 5

1-5-1- قلمرو موضوعی............................... 5

1-5-2- قلمرو مکانی................................ 5

1-5-3- قلمرو زمانی................................ 6

1-6- محدودیت­های تحقیق............................. 6

1-7- روش تحقیق.................................... 6

1-8- شرح واژه­ها و اصطلاحات بکار رفته در تحقیق...... 7

فصل دوّم: مروری بر تحقیقات انجام شده

2-1- مقدمه........................................ 8

2-2- بورس اوراق بهادار............................ 9

2-2-1- علل پیدایش بورس اوراق بهادار............... 9

2-2-2- سابقه ایجاد بورس در ایران.................. 11

2-2-3- جایگاه بورس اوراق بهادار در بازار سرمایه ایران    12

2-2-4- معیارهای تشخیص میزان و نحوه فعالیت یک بورس. 12

2-2-5- مزایای سرمایه­گذاری در بورس................. 13

2-2-6- مزایای ورود به بورس برای شرکت­ها............ 14

2-2-7- مؤلفه­های اصلی بورس اوراق بهادار............ 14

2-2-8- روش­های ورود به بورس اوراق بهادار........... 16

2-2-9- روش­های تحلیل اوراق بهادار.................. 16

2-2-10- مقررات حاکم بر بازار بورس اوراق بهادار.... 18

2-3- سهام عادی.................................... 25

2-3-1- مفهوم سهام و سهام عادی..................... 25

2-3-1-1- مفاهیم مرتبط با سهام عادی................ 25

2-3-1-1-1- حق مالکیت.............................. 25

2-3-1-1-2- سررسید سهام عادی....................... 26

2-3-1-1-3- حق رأی................................. 26

2-3-1-1-4- ارزش دفتری............................. 27

2-3-1-1-5- حق تقدم خرید سهام ..................... 27

2-3-1-1-6- تعیین ارزش سهام عادی................... 28

2-3-2- نحوه تصمیم گیری خریداران سهام عادی در بورس اوراق بهادار   29

2-3-2-1- انتخاب سهام.............................. 29

2-3-2-1-1- انواع تجزیه و تحلیل بنیادی............ 30

2-3-2-2- تعیین ارزش سهام عادی..................... 35

2-3-2-2-1- براساس سود............................ 35

2-3-2-2-2- براساس سود سهام پرداختی................ 36

2-4- عوامل تأثیرگذار بر انتخاب سهام توسط سرمایه­گذاران    38

2-4-1- مفهوم سرمایه­گذاری.......................... 38

2-4-2- راهبردهای سرمایه­گذاری...................... 38

2-4-3- مدل­های تصمیم­گیری سرمایه­گذاران.............. 39

2-4-3-1- مدل تصمیم­گیری اقتصادی عقلائی.............. 39

2-4-3-2- مدل اقتصادی رفتاری....................... 39

2-4-3-3- مدل نوین مالی............................ 39

2-4-3-4- مدل / تئوری چشم انداز ................... 40

2-4-4- نظریات تأثیرگذار بر رفتار سرمایه­گذاران..... 42

2-4-4-1- عوامل استراتژیک مکمل در بازار مالی...... 42

2-4-4-2- نظریات جمعیتی و مدل­های آموزشی........... 42

2-4-4-3- نظریه بازی­های هماهنگ.................... 42

2-4-5- عوامل مؤثر بر سرمایه­گذاری سهام............. 42

2-4-5-1- ویژگی­های سرمایه گذاران................... 49

2-4-5-2- ویژگی­های بازار سرمایه.................... 51

2-4-5-6- بررسی صورت‌های مالی اساسی................. 60

2-4-5-7- بررسی نسبت‌های مالی....................... 61

2-5- پیشینه تحقیق................................. 66

2-5-1- پژوهش­های انجام شده در ایران................ 66

2-5-2- پژوهش­های انجام شده در جهان................. 72

2-6- مدل مفهومی تحقیق............................. 75

2-7- جمع­بندی...................................... 76

فصل سوّم: مواد و روش ها

3-1- مقدمه........................................ 77

3-2- روش تحقیق.................................... 78

3-3- فرآیند تحقیق................................. 78

3-3-1- شناسایی عوامل موثر بر تصمیم­گیری سهامداران در خرید سهام عادی .................................................. 78

3-3-1-1- استخراج شاخص‌های اولیه براساس سابقه پژوهش. 78

3-3-2- جمع‌آوری داده‌‌های تحقیق...................... 80

3-3-3- تحلیل داده‌های تحقیق........................ 80

3-4- جامعه آماری.................................. 81

3-5- نمونه آماری.................................. 82

3-6- روش گردآوری داده­ها........................... 82

3-7- روایی پرسشنامه............................... 82

3-7-1-تحلیل عاملی................................. 83

3-8- پایایی پرسشنامه.............................. 85

3-9- روش­ها و تکنیک­های تجزیه و تحلیل داده­ها ....... 85

3-9-1- تکنیک تاپسیس............................... 86

3-9-2- تکنیک تحلیل سلسله مراتبی (AHP)............ 88

3-9-2-1- اصول فرآیند تحلیل سلسله مراتبی........... 88

3-10- فرضیّات نهایی پژوهش.......................... 89

3-11- جمع­بندی..................................... 89

فصل چهارم: نتایج

مقدمه............................................. 90

4-1- بخش اوّل: نمونه­گیری و آمار توصیفی............. 91

4-1-1- نمونه­گیری سهامداران بورس اوراق بهادار تهران 91

4-1-2- توصیف آماری مربوط به نمونه آماری .......... 91

4-2- بخش دوّم: سنجش پایایی و روایی ابزار تحقیق..... 96

4-2-1- پایایی پرسشنامه پژوهش...................... 96

4-2-2- روایی پرسشنامه پژوهش....................... 97

4-3- بخش سوّم: تحلیل آماری پرسشنامه اهمّیت شاخصها.. 100

4-3-1- تحلیل پرسشنامه اهمیّت شاخصها............... 100

4-4- بخش چهارم: اولویت­بندی ابعاد و شاخصها........ 106

4-5- نتیجه­گیری .................................. 109

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

- مقدمه.......................................... 110

5-1- تشریح تحلیل­های آماری و نتایج تحقیق.......... 110

5-2- پاسخ به سوالات و فرضیات پژوهش................ 113

5-3- پیشنهادات برای تحقیقات آتی.................. 114

پیوست ........................................... 116

منابع و مأخذ..................................... 122

چکیده انگلیسی ................................... 130