لینک دانلود و خرید پایین توضیحات
فرمت فایل word و قابل ویرایش و پرینت
تعداد صفحات: 19
روش شناسائی یرسینیا انتروکلی تیکا 1
در مواد غذائی
-0 مقدمه
جنس یرسینیا با پذیرفتن نام‌های متعددی چون فلاوباکتریوم پسودومولئی، باکتریوم انتروکلی تیکا، پاستور لاپسودوتوبرکلوزیس، پاستور X و ژرم X نهایتا از سال 1974 از خانواده پاستور لاسه جدا و به همراه سه گونه اصلی یرسینیاپستیس، یرسینیا پسودوتوبرکلوزیس و یرسینیا انتروکلی تیکا بطور قطعی در خانواده آنتروباکتریا سه جای گرفت.
این باکتریها از جمله بیماری زاهای مشترک انسان و دام هستند و مهم ترین گونه‌ای که نقش آن در بیماری زایی انسان از سال 1965 به اثبات رسیده است یرسینیا انتروکلی تیکا می‌باشد، شیر خام، گوشت، سبزیجات و آب می‌تواند بعنوان منبع آلودگی این باکتری مطرح باشد.
یرسینیا انتروکلی تیکا می‌تواند عامل بیماری معدی روده‌ای، آدنیت مزانتریک، اریتم گره‌دار عفونت خونی و پلی آرتریت باشد. این ارگانیسم، کوکو باسیلی است گرم منفی، بدون کپسول، بی‌هوازی اختیاری بطول 1-3 میکرومتر و عرض 0/5 - 0/8 میکرومتر که حرکت آن فقط در دمای پائین تر از 30 درجه سلسیوس به کمک فلاژل‌های پیرامونی صورت می‌گیرد. دمای مناسب رشد آن 28-29 درجه سلسیوس PH مناسب آن 7/2 - 7/4 است و مانند اکثر آنتروباکتریاسه‌ها گلوکز را بدون گاز تخمیر می‌کند و اکسیداز منفی است.
سروتیپ‌های جدیدی چون 0:13a; 13b, 0:4,32, 0:5,27, 0:21 بیماری‌زا تشخیص داده شده‌اند. بیشترین سروتیپ‌های بیماری‌زا 0:3 0:8, 0:9 می‌باشد.
از نظر سرولوژی آگلوتیناسیون‌های متقاطع با ارگانیسم‌هایی مانند سالمونلا، بروسلا، شیگلا، اشری شیاکلی و ویبربو گزارش شده است.
1 ـ هدف و دامنه کاربرد
هدف از تدوین این استاندارد ارائه روش جداسازی و شناسایی یرسینیا انتروکلی تیکای بیماری زا برای انسان است . این روش در مورد فرآوردههای غذایی انسان و دام کاربرد دارد . 2 ـ واژهها و تعاریف در این استاندارد واژهها با تعاریف زیر بکار میروند :
هدف از تدوین این استاندارد ارائه روش جداسازی و شناسایی یرسینیا انتروکلی تیکای بیماری زا برای انسان است . این روش در مورد فرآوردههای غذایی انسان و دام کاربرد دارد .
2 ـ واژهها و تعاریف
در این استاندارد واژهها با تعاریف زیر بکار میروند : 2 ـ 1 ـ یرسینیا آنتروکلی تیکای بیماری زا باکتریهای سرما گرایی هستند که اگر طبق روش مشروح در این استاندارد آزمایش شوند روی محیط های جامد انتخابی پرگنههای ویژهای ایجاد مینمایند که از نظر خواص بیوشیمیایی با معیارهایی بیماری زائی این استاندارد مطابقت می‌کند .
در این استاندارد واژهها با تعاریف زیر بکار میروند :
2 ـ 1 ـ یرسینیا آنتروکلی تیکای بیماری زا
باکتریهای سرما گرایی هستند که اگر طبق روش مشروح در این استاندارد آزمایش شوند روی محیط های جامد انتخابی پرگنههای ویژهای ایجاد مینمایند که از نظر خواص بیوشیمیایی با معیارهایی بیماری زائی این استاندارد مطابقت می‌کند .
2 ـ 2 ـ شناسایی یرسینیا آنتروکلی تیکا
شامل حضور یا عدم حضور این باکتری در مقدار معینی از فرآورده غذایی است که بر طبق روش مشروح در این استاندارد تعیین میشود .
3 ـ اساس آزمایش
شناسایی یرسینیا آنتروکلی تیکای احتمالا بیماری زا در طی سه مرحله پی در پی زیر صورت می‌گیرد . 3 ـ 1 ـ غنی سازی در محیط مایع انتخابی 3 ـ 1 ـ 1 ـ کشت نمونه مورد آزمون در دو محیط غنی کننده زیر :
شناسایی یرسینیا آنتروکلی تیکای احتمالا بیماری زا در طی سه مرحله پی در پی زیر صورت می‌گیرد .
3 ـ 1 ـ غنی سازی در محیط مایع انتخابی
3 ـ 1 ـ 1 ـ کشت نمونه مورد آزمون در دو محیط غنی کننده زیر :
الف آبگوشت نمک های صفراوی و سوربیتول و پپتن
Peptone Sorbitol and Bile salts Broth (PSB )
ب : آبگوشت ایرگازان ـ تیکارسیلین وکلرات پتاسیم
Jrgasan ticarcillin and Potassium chlorate broth (ITC)
3 ـ 1 ـ 2 ـ گرمخانه گذاری
کشت (PSB) در دمای 25 ـ 22 درجه سلسیوس بمدت 3 تا 5 روز
کشت (ITC) در دمای 25 ـ 22 درجه سلسیوس بمدت 2 روز (48 ساعت )
3 ـ 2 ـ کشت در محیطهای جامد
کشت سطحی از محیطهای PSB.ITC بترتیب در محیطهای جامد زیر :
3 ـ 2 ـ 1 ـ محیط سفسولودین ـ ایرگازان و نووبیوسین آگار
Cefsulodin Irgasan and novobiocin agar (CIN)
3 ـ 2 ـ 2 ـ محیط سالمونلا ـ شیگلا آگار حای ذرکسی کلات سدیم و کلرور کلسیم
Salmonella / Shigella agar with Sodium desoxychlate and Calcium chloride (SSDC)
3 ـ 2 ـ 3 ـ گرمخانه گذاری
محیطهای CIn و SSDC در دمای 30 درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید . پس از 24 ساعت و در صورت لزوم پس از 48 ساعت متناسب با محیط , کشت ها را به منظور حضور پرگنه های ویژه یرسینیا آنتروکلی تیکا بررسی کنید .
3 ـ 3 ـ تایید
در این مرحله روی پرگنههای مشکوک به یرسینیا آزمایشهای بیوشیمیایی , آزمایش های خاص منطبق با معیارهای بیماری زایی و در صورت امکان آزمایش های سرولوژیکی برای تایید انجام میشود .
به راهنمای روش کار مراجعه شود .
روش شناسائی یرسینیا انتروکلی تیکا 1